mir-143在结直肠癌发生发展中的机制研究

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1、中图分类号R656．9UDC6lO博士学位论文学校代码!Q三3三密级．公珏miR-143在结直肠癌发生发展中的机制研究ThemechanismstudyofmiR—-143inthedevelopmentofcolorectalcarcinoma作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：李亚勇临床医学外科学湘雅三医院陈道瑾教授答辩委员会主席中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，

2、也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：拯日期：≤兰生年—刍!日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：导师签名摘要miR-143在结直肠癌发

3、生发展中的机制研究在世界范围内，结直肠癌(colorectalcarcinoma，CRC)的发病率以及其死亡率在恶性肿瘤中均位居于第三位。研究发现，CRC在亚洲地区中的经济较发达的地区，其发生率也呈现逐年增长的趋势。CRC的发病率在我国也呈现出逐步上升之趋势。CRC已经严重威胁到我国人民的健康，因而深入的探索CRC发病的机制以及治疗手段就成了研究热点。作为一种非编码小RNA，microRNA即miRNA在基因的调控、表达等方面有着重要的作用。多项研究表明miRNA的表达失调和CRC的发生及发展存在密切的关联关系。已有的研究表明，miR一143可能参与调

4、节CRC细胞生长，细胞凋亡和某些化疗反应关键蛋白，但其具体的作用机制、调控途径、与CRC遗传易感性等有待于进一步深入的研究和阐明。本研究从miR一143对结直肠癌细胞生物学行为的影响、miR．143对结直肠癌细胞中Survivin、C．myc表达的影响、miR一143联合奥沙利铂对结直肠癌细胞的作用影响、miR．143基因启动子区多态性与结直肠癌遗传易感性的关系等四个方面对miR一143在结直肠癌发生发展中的作用机制做了初步的探讨和研究。miR-143对结直肠癌细胞生物学行为的影响目的：研究过表达miR-143在结直肠癌细胞中对其生物学行为的影响。方法

5、：构建miR．143真核表达载体，．用lipofectamine2000脂质体转染SW-480细胞，建立稳定高表达的miR．143细胞系。采用Realtime．PCR技术鉴定转染效率。并分别运用流式细胞、transwell以及MTT检测细胞的凋亡、侵袭和增殖等特征。结果：两组载体转染组均有明显的GFP表达。其中1¨gpGenesil．1．miR．143载体组和299pGenesil．1．miR-143载体组的IIliR．143的相对表达量分别为10．61+0．36和12．83+0．38，而对照组的miR．143的相对表达量为2．53+0．83。1ggp

6、Genesil．1载体组细胞，299pGenesil．1载体组细胞穿过基底膜细胞明显少于对照组细胞。两组实验组与对照组相比能使细胞凋亡增加，细胞周期较多停滞在G2期。MTT结果显示两组实验组细胞生长活力较对照组均明显降低，并且的MTT值在48h、72h、96h及120h均有显著性差异(P

7、143对结直肠癌细胞中Survivin、C．myc表达的影响目的：研究miR．143对结直肠癌细胞中Survivin、C．mye表达的影响，从而探讨miR．143在结直肠癌中可能的靶基因。方法：将结肠癌细胞SW-480细胞分为4组，未处理对照组，1嵋pGenesil．1．miRl43载体组，5嵋pGenesil．1．miRl43载体组和10pgpGenesil．1．miRl43载体组。在转染实验完成后通过realtimePCR检测不同组别的miR．143和survivin、c．mye表达的变化，并采用统计学方法分析miR-143和survivin、mi

8、R．143和c．myc表达的关联。通过western．blot检测Akt信号通路的变化。结果：