mir-181berkp53在冬凌草甲素对胰腺癌细胞凋亡中的作用

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1、温州医学院硕士学位论文论文题目：丛iB：呈垒呈坠堡B鲤量圣查釜凌堇里塞挝腿速疸答辩委员会主席：鲎邀≤逝江太堂险届箍二医院≥答辩委员会成员：塞丛筮室≤渔趔医堂院附属箜三医院≥韭住≤湿趔医堂陵附属箜三医院≥温州医学院硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”001英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯O0eO03前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·5材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯006结果·⋯⋯··OO0·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··OO0··⋯··OOQO0010O⋯·21分析与讨论⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”34参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OO0QeO036附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯····⋯·40致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯··41综述：冬凌草甲素的抗肿瘤潜能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··42参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OO048独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··52温州医学院硕士学位论文MiR-181b／ERK／P53在冬凌草甲素对胰腺癌细胞凋亡中的作用中文摘要目的：l、观察不同浓度冬凌草甲

3、素在体外对胰腺癌细胞株PANC一1细胞增殖、凋亡的影响以及对miR．t81b在冬凌草甲素诱导胰腺癌细胞凋亡中功能的评价；2、在体内，通过不同质量浓度的药物对裸鼠原位移植瘤模型的作用，对其作用机制进一步研究和论证。方法：l、在体外，培养人胰腺癌PANC．1细胞。CCK．8用于检测冬凌草甲素的抗肿瘤细胞增殖。AnnexinV-FITC／PI双染流式细胞术用于细胞凋亡的检测；其中MAPK抑制剂将用于对其机制的初步研究。细胞凋亡形态学的改变用倒置显微镜和荧光显微镜分析。细胞转染技术用于评价miR一181b的功能评价及相关指标的测定。2、在体内，建立胰腺癌裸鼠原位移植瘤模型，分为四

4、组：生理盐水对照组(N组)、8mg／Kg冬凌草甲素组(08组)、16mg／Kg冬凌草甲素组(016组)和24mg／Kg冬凌草甲素组(024组)，各组通过腹腔注射给药，每天一次，共持续给药四周。药物治疗l周后处死裸鼠，检测实验前后裸鼠体重变化。TUNEL法检测移植瘤组织的细胞凋亡情况；WB和荧光定量PCR检测Caspase8、Bax、p-p38、p-38、．INK、p-JNK、ERKI／2、p-ERK1／2、p-p53等指标的表达。结果：1、冬凌草甲素在体外可诱导人胰腺癌细胞系PANC．1的增殖抑制和凋亡。倒置显微镜可见细胞呈核皱缩、核裂解等凋亡征象；荧光显微镜可见细胞呈现

5、早期和晚期凋亡之不同的改变。冬凌草甲素抑制PANC．1细胞的增殖，且随着浓度的增高、时间的延长，抑制越为明显，且其50％抑制浓度(IC50)为169mol／l，与对照组相比各实验组统计结果有统计学意义(P<0．05)。流式细胞术研究证实：冬凌草甲素可促进胰腺癌细胞的凋亡，且具有药物浓度依赖性；MEKl／2抑制剂U0126可逆转其凋温州医学院硕士学位论文亡诱导作用。暂时性转染miR．181b证实：冬凌草甲素可诱导miR．181b的下调，其miR-181binhibitor可诱导细胞的凋亡。2、一定质量浓度的冬凌草甲素对裸鼠原位移植瘤模型具有一定的治疗意义，能够有效抑制肿瘤生

6、长和促进细胞的凋亡。通过WesternBlot证实：冬凌草甲素可有效上调凋亡相关蛋白Caspase8、Bax、p-p53的表达以及对Bcl-2和p-ERKl／2的表达抑制。结论：1、冬凌草甲素在体外可通过线粒体路径诱导胰腺癌PANC．1细胞的凋亡，抑制细胞增殖；其机制与冬凌草甲素诱导miR．181b的下调对抑癌基因p53的激活和对p-ERKl／2的表达抑制密切相关。2、冬凌草甲素在体内可抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长；此作用是通过抑制p-ERKl／2和Bcl·2的表达以及促进Bax、Caspase8、p-p53的表达促进肿瘤细胞凋亡而实现。关键词胰腺癌冬凌草甲素miR．181

7、b胰腺癌原位癌移植瘤模型p-ERKl／2p-p53温州医学院硕士学位论文OridoninInducedApoptosisofPancreaticCancerCellPANC--1throughMiR--181b／ERK／P53PathwayObjectiveAbstract1·ToobservetheeffectionoforidoninandmiR-181btohumanpancreaticcancercelllinesPANC-1inthecellproliferationandapoptosisinvitro．2．Toa