甾体激素对神经母细胞株sk-n-sh细胞摄取甘氨酸的快速作用

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1、生理学报,1999年12月,51(6),603～608603ActaPhysiologicaSinica研究论文甾体激素对神经母细胞株SK2N2SH细胞3摄取甘氨酸的快速作用33333毕　钢　陈宜张(第二军医大学神经科学研究所,上海200433)摘　要　　本研究观察了SK2N2SH细胞摄取甘氨酸的一般情况,并进一步研究了甾体激素对+SK2N2SH细胞摄取甘氨酸的快速作用。结果显示:SK2N2SH细胞高亲和力的甘氨酸摄取是Na-和Cl依赖性的。皮质酮、孕酮和地塞米松对这种摄取有快速促进作用,雌二醇和脱氧皮质酮-9-6无明显作用,表明

2、甾体激素快速作用有特异性。皮质酮作用在10～10mol/L范围内呈浓度依赖性。皮质酮快速作用不受蛋白质合成抑制剂影响。耦联牛血清白蛋白后,快速作用仍然存2+在。但细胞外液无Ca影响甾体激素快速作用。结果提示皮质酮、孕酮和地塞米松对SK2N2SH细胞摄取甘氨酸的快速作用是通过甾体激素非基因组机制作用完成的。关键词:甾体激素;SK2N2SH细胞;甘氨酸;非基因组机制;摄取学科分类号:Q463　　有资料报道甾体激素可以通过快速调节中枢神经递质摄取而影响其功能,但甾体激素对甘氨酸摄取的快速作用尚未见报道,我们对此进行了研究。我们在突触体上

3、初步观[1]察到皮质酮和孕酮对甘氨酸摄取有快速促进的非基因组作用,但突触体只是细胞的某一部分,它并不能完全反映细胞生理情况下的功能活动。粗制突触体成分复杂,不但含有[2]突触体,还含有线粒体膜和胶质小泡等成分。另外不同功能的突触体混合在一起,难以分清楚甾体激素对神经细胞与胶质细胞作用的差别。为了观察甾体激素对神经细胞的作用,我们利用人神经母细胞瘤SK2N2SH细胞株进行了实验,因为迄今尚未见有关SK2N2SH细胞摄取甘氨酸的报道,我们首先观察了甘氨酸摄取的主要特征,并在此基础上进一步探讨了甾体激素对SK2N2SH细胞摄取甘氨酸的快

4、速作用及及其作用的可能机制。1　材料和方法111　细胞株　　SK2N2SH细胞株来源于人神经母细胞瘤,由中国科学院上海细胞生物研1999201221收稿　　1999203228修回3国家自然科学基金资助项目(No139330100,39840010)33现在地址:海军医学研究所二室,上海200433333联系作者.Tel:25070261.E2mail:yzchen@public1sta1net1cn©1995-2005TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd.Allrightsreserved.604

5、生　　理　　学　　报　　　　　　　　　　　　　　　51卷究所提供。112　激素　　皮质酮(CORT);孕酮(P);雌二醇(E2);地塞米松(DEX)(Sigma公司),以-6-7上试剂均为水溶性。甾体激素溶液的配制:用10mol/L的甘氨酸液配成10mol/L。脱-2-6氧皮质酮(DOC)(Sigma公司),先用无水乙醇溶解成10mol/L,再用10mol/L甘氨酸-7液稀释至10mol/L。3113　同位素　　H2甘氨酸,比活度548GBq/mmol,放射性浓度37MBq/ml,放化纯度9716%(Amersham公司)。114

6、　试剂　　HEPES,德国Merck公司产品。液体闪烁剂,美国CanberraCompany公司产品。放线菌酮、牛血清白蛋白耦联皮质酮(B2BSA)、甘氨酸(GLY)为美国Sigma公司产品。115　细胞培养　　用RPM1640培养液(内含10%小牛血清)。先将细胞接种于培养瓶,置于5%CO2、95%空气、37℃和一定湿度的CO2孵箱中,细胞贴壁长满后,以0125%胰蛋白酶消化,使细胞脱落,1000转/min离心5min收集细胞,再用RPM1640培养液稀释,等量接种于24孔培养板,3～4d后细胞可长满培养孔,即可做摄取实验。[3

7、]116　甘氨酸摄取　　按照Zafra等的方法。实验设非特异组,对照组和特殊处理组。倒尽24孔培养板中培养液,用1mlKrebs2HEPES液洗涤2次。每孔加入Krebs2HEPES液015ml,其中所含试剂如下:(1)非特异性组:1mol/L非标记甘氨酸,37kBq标记甘氨酸。(2)对照组:1μmol/L非标记甘氨酸,37kBq标记甘氨酸。(3)特殊处理组:1μmol/L非标记甘氨酸,37kBq标记甘氨酸,其它试剂根据实验不同而异,可以是甾体激素和放线菌酮等。6非特异性组中非标记甘氨酸浓度是特殊处理组和对照组10倍,则其细胞摄取

8、标记甘氨-6酸的量是其他组的10倍,理论上非特异性组的同位素计数应基本为零,其实测值为本+-底。观察Na和Cl对甘氨酸摄取影响,分别用无相应离子的Krebs2HEPES液做实验,观2+2+察Ca对皮质酮快速作用影响时,去掉Krebs2HEPES液中