激活lxr对海马神经元神经甾体合成的促进作用

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1、激活LXR对海马神经元神经甾体合成的促进作用作者：张淑坤，杨荣慧，张翠欣，姜玲玲，侯艳宁【摘要】目的：研究肝X受体（LXR）激活对海马神经元神经甾体合成的影响.方法：将大鼠海马神经元体外培养至第7日，在培养液中加入2.0μmol/LTO901317，继续培养48h.应用高效液相质谱联用（HPLCMS）分离测定培养液中游离型神经甾体孕烯醇酮（PREG）、脱氢表雄酮（DHEA）和结合型神经甾体孕烯醇酮硫酸酯（PREGS）、脱氢表雄酮硫酸酯（DHEAS）的含量；RTPCR方法观察海马神经元P450侧链裂

2、解酶（P450scc）、甾体合成快速调节蛋白（StAR）和3β羟基甾醇脱氢酶（3βHSD）等神经甾体合成关键酶基因的mRNA的表达.结果：TO901317激活LXR，促进P450scc，StAR和3βHSD的mRNA表达，增加海马神经元培养液中神经甾体PREG，DHEA，PREGS和DHEAS含量.结论：LXR激活时，可通过上调海马神经元P450scc，StAR和3βHSD的mRNA表达，促进神经甾体的合成.【关键词】肝X受体；P450侧链裂解酶；神经甾体；海马,神经元　　【Abstract】A

3、IM:ToinvestigatetheeffectofliverXreceptor(LXR)activationonthesynthesisofneurosteriodinhippocampalneurons.METHODS:Onday7ofculture,hippocampalneuronsol/LTO901317dissolvedindimethylsulfoxidefor48h.ThemRNAexpressionsofP450sidechaincleavage(P450scc),steroidog

4、enicacuteregulatoryprotEin(StAR)and3βhydroxysteroiddehydrogenase(3βHSD)easuredbyRTPCRandthecontentsofunconjugatedneurosteriodspregnenolone(PREG),dehydroepiandrosterone(DHEA)andconjugatedneurosteroidspregnenolonesulfate(PREGS),dehydroepiandrosteronesul

5、fate(DHEAS)inmediuminedusinghighperformanceliquidchromatographymassspectrometry(HPLCMS).RESULTS:IncubationofhippocampalneuronsRNAandthelevelsofPREG,DHEA,PREGSandDHEAS.CONCLUSION:ActivationofLXRcontributestothesynthesisofneurosteriodbyupregulatingthee

6、xpressionsofP450scc,StARand3βHSDinhippocampalneurons.　　【Keye;neurosteroid;hippocampus;neurons　　0引言　　中枢神经系统的胆固醇在甾体合成快速调节蛋白（StAR）的引导下被转运到线粒体内膜，然后由P450侧链裂解酶（P450scc）催化生成孕烯醇酮（PREG），后者在3β羟基甾醇脱氢酶（3βHSD）等的催化下转化成脱氢表雄酮（DHEA），PREG和DHEA在磺基转移酶的催化下生成结合型神经甾体孕烯醇酮硫酸酯

7、（PREGS）和脱氢表雄酮硫酸酯（DHEAS），发挥生物效应.体外培养海马神经元和小鼠阿尔茨海默病（AD）模型均表明，用人工合成配体TO901317激活肝X受体（LXR）能增加其下游基因ATP结合盒转运体A1（ABCA1）的表达，阻止AD发生［1-2］.本实验旨在观察LXR激活时对海马神经元神经甾体的合成和分泌有何影响.　　1材料和方法　　1.1材料　　DMEM、优级胎牛血清（Hyclone公司）；L左旋多聚赖氨酸、阿糖胞苷、二甲基亚砜、TO901317（Sigma公司）；胰蛋白酶（Gibco公司）；

8、Trizol（美国Invtrogen公司）；逆转录试剂盒（美国Promega公司）；pfuDNA聚合酶（北京Tiangen公司）；Agilent液相色谱质谱联用仪［HP1100自动进样器、大气压化学离子源(APCI)及四极杆质谱检测器］；神经甾体标准品（Sigma公司）.　　1.2方法　　1.2.1海马神经元原代培养及处理采用　　2结果　　2.1LXR激活对海马神经元ABCA1mRNA表达的影响与对照组相比，处理组海马神经元ABCA1mR