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时间:2018-11-16
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1、激活LXR对海马神经元神经甾体合成的促进作用作者:张淑坤,杨荣慧,张翠欣,姜玲玲,侯艳宁【摘要】目的:研究肝X受体(LXR)激活对海马神经元神经甾体合成的影响.方法:将大鼠海马神经元体外培养至第7日,在培养液中加入2.0μmol/LTO901317,继续培养48h.应用高效液相质谱联用(HPLCMS)分离测定培养液中游离型神经甾体孕烯醇酮(PREG)、脱氢表雄酮(DHEA)和结合型神经甾体孕烯醇酮硫酸酯(PREGS)、脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)的含量;RTPCR方法观察海马神经元P450侧链裂
2、解酶(P450scc)、甾体合成快速调节蛋白(StAR)和3β羟基甾醇脱氢酶(3βHSD)等神经甾体合成关键酶基因的mRNA的表达.结果:TO901317激活LXR,促进P450scc,StAR和3βHSD的mRNA表达,增加海马神经元培养液中神经甾体PREG,DHEA,PREGS和DHEAS含量.结论:LXR激活时,可通过上调海马神经元P450scc,StAR和3βHSD的mRNA表达,促进神经甾体的合成.【关键词】肝X受体;P450侧链裂解酶;神经甾体;海马,神经元 【Abstract】A
3、IM:ToinvestigatetheeffectofliverXreceptor(LXR)activationonthesynthesisofneurosteriodinhippocampalneurons.METHODS:Onday7ofculture,hippocampalneuronsol/LTO901317dissolvedindimethylsulfoxidefor48h.ThemRNAexpressionsofP450sidechaincleavage(P450scc),steroidog
4、enicacuteregulatoryprotEin(StAR)and3βhydroxysteroiddehydrogenase(3βHSD)easuredbyRTPCRandthecontentsofunconjugatedneurosteriodspregnenolone(PREG),dehydroepiandrosterone(DHEA)andconjugatedneurosteroidspregnenolonesulfate(PREGS),dehydroepiandrosteronesul
5、fate(DHEAS)inmediuminedusinghighperformanceliquidchromatographymassspectrometry(HPLCMS).RESULTS:IncubationofhippocampalneuronsRNAandthelevelsofPREG,DHEA,PREGSandDHEAS.CONCLUSION:ActivationofLXRcontributestothesynthesisofneurosteriodbyupregulatingthee
6、xpressionsofP450scc,StARand3βHSDinhippocampalneurons. 【Keye;neurosteroid;hippocampus;neurons 0引言 中枢神经系统的胆固醇在甾体合成快速调节蛋白(StAR)的引导下被转运到线粒体内膜,然后由P450侧链裂解酶(P450scc)催化生成孕烯醇酮(PREG),后者在3β羟基甾醇脱氢酶(3βHSD)等的催化下转化成脱氢表雄酮(DHEA),PREG和DHEA在磺基转移酶的催化下生成结合型神经甾体孕烯醇酮硫酸酯
7、(PREGS)和脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS),发挥生物效应.体外培养海马神经元和小鼠阿尔茨海默病(AD)模型均表明,用人工合成配体TO901317激活肝X受体(LXR)能增加其下游基因ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的表达,阻止AD发生[1-2].本实验旨在观察LXR激活时对海马神经元神经甾体的合成和分泌有何影响. 1材料和方法 1.1材料 DMEM、优级胎牛血清(Hyclone公司);L左旋多聚赖氨酸、阿糖胞苷、二甲基亚砜、TO901317(Sigma公司);胰蛋白酶(Gibco公司);
8、Trizol(美国Invtrogen公司);逆转录试剂盒(美国Promega公司);pfuDNA聚合酶(北京Tiangen公司);Agilent液相色谱质谱联用仪[HP1100自动进样器、大气压化学离子源(APCI)及四极杆质谱检测器];神经甾体标准品(Sigma公司). 1.2方法 1.2.1海马神经元原代培养及处理采用 2结果 2.1LXR激活对海马神经元ABCA1mRNA表达的影响与对照组相比,处理组海马神经元ABCA1mR
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