cga和survivin在胃癌组织中的表达及临床意义

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延边大学硕士学位论文学校代码：10184分类号：分类号：医学硕士学位论文CgA和Survivin在胃癌组织中的表达及临床意义ExpressionandclinicalsignificanceofCgAandSurviviningastriccarcinomatissue张恩含外科学延边大学万方数据 延边大学硕士学位论文医学硕士学位论文CgA和SURVIVIN在胃癌组织中的表达及临床意义2014万方数据 延边大学硕士学位论文分类号密级UDC学号2011010684延边大学硕士学位论文CgA和Survivin在胃癌组织中的表达及临床意义研究生姓名张恩含培养单位延边大学临床学院指导教师姓名、职称李林虎教授学科专业临床医学研究方向外科学-胃肠肿瘤论文提交日期2013年5月23日万方数据 延边大学硕士学位论文本论文已达到医学硕士学位论文要求答辩委员会主席金仁顺（印）答辩委员会委员金恩鸿（印）答辩委员会委员李革（印）延边大学2014年05月23日万方数据 延边大学硕士学位论文学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标记和致谢的部分外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得任何教育机构的学位或学历而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人如违反上述声明，愿意承担由此引发的一切责任和后果。研究生签名：张恩含日期：2014年06月04日学位论文使用授权声明本人在导师指导下所完成的学位论文，学校有权保存其电子和纸制文档，可以借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容，可以向有关部门或机构送交并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密论文，按保密的有关规定和程序处理。本学位论文属于：1.保密，在年解密后适用于本声明；2.不保密√。研究生签名：张恩含导师签名：李林虎日期：2014年06月04日万方数据 延边大学硕士学位论文摘要目的：探讨CgA和Survivin在胃癌组织中的表达及临床意义。方法：收集本院普一科手术切除的胃癌病理标本120例，采用免疫组织化学染色法，观察CgA和Survivin在胃癌组织中的表达，分析CgA和Survivin表达与胃癌的TNM分期和病理分级关系。结果：1.CgA在胃癌和癌旁组织中的阳性表达率各为46.67%和5.83%，Survivin在胃癌和癌旁组织中的阳性表达率各为52.50%和9.17%，两组比较均有显著性差异(P<0.01)。2.CgA和Survivin表达均与胃癌的TNM分期和病理分级相关(均P＜0.01）。3.CgA阳性表达的56例中Survivin阳性表达率为85.7%；Spearman分析二者表达率呈明显正相关(r=0.42，P＜0.01）。结论：CgA和Survivin阳性表达与胃癌的TNM分期和病理分级有关；CgA和Survivin在胃癌的发生发展过程中发挥协同作用；Survivin有望成为胃癌靶向治疗的新靶点。关键词:胃癌,免疫组化,CgA,SurvivinI万方数据 延边大学硕士学位论文AbstractObjective:ToexploretheexpressionandclinicalsignificanceofCgAandSurviviningastriccanrcinoma.Methods:TheexpressionofCgAandSurvivinwereexaminedin120casesofgastriccarcinomaandtheircorrespondingnormaltissuesbySPimmunohistochemicalstaining.TherelationshipsbetweentheCgAorSurvivinexpressionlevelsanditsclinicopathologicalcharacteristicswerealsoinvestigated.Results:1.TheCgA-positiveandSurvivin-positiveexpressioningastriccarcinomawere46.67%(56/120)and52.50%(63/120),whichhadstatisticalsignificantdifferencesfrom5.83%(7/120)and9.17%(11/120)innormalgastrictissues.2.ExpressionofCgAorSurvivinwerecloselycorrelatedtoTNMstagesandpathologicalgrading(P＜0.01).3.Survivinpositiveexpressionratewas85.7%In56caseswithCgApositiveexpressionandthetwoindexexpressionratewassignificantlycorrelatedusingSpearmananalysis(r=0.42,P<0.01).Conclusion:CgAandSurvivinproteinhadahighcorrelationwithTNMstagesandpathologicalgrading.CgAandSurvivinplayasynergisticroleintheoccurrenceanddevelopmentofgastriccancer.ResultsindicatedthatSurvivinmayprovideapromisingtargetgenetherapywayofgastriccancer.Keywords:Cancerofthestomach,Immunohistochemical,CgA,SurvivinII万方数据 延边大学硕士学位论文目录摘要...................................................................................................................IAbstract................................................................................................................II前言...................................................................................................................4第一章：材料和方法...........................................................................................61.1研究资料..................................................................................................61.2仪器和设备..............................................................................................61.3试剂........................................................................................................61.4方法..........................................................................................................61.5结果判定..................................................................................................81.6统计学处理..............................................................................................9第二章：结果...................................................................................................102.1临床资料.......................................................................................102.2CgA与Survivin在胃癌与癌旁组织中的表达............................102.3CgA与Survivin表达与胃癌临床病理参数的关系...................112.4CgA与Survivin的相关性...........................................................152.5附图...............................................................................................17第三章：讨论....................................................................................................20第四章：结论....................................................................................................24参考文献..............................................................................................................25综述:...................................................................................................................28参考文献..............................................................................................................38致谢......................................................................................................................433万方数据 延边大学硕士学位论文前言在全球范围内恶性肿瘤发病率呈快速增长的趋势，据预测2020年全球恶性肿瘤的新发病人数将达到2000多万人，死亡病例将达到1200多万人，2030年新增加2600万人的癌症病例，死亡人数将达到1700多万人，癌症已成为全球最[1][2]大的公共健康问题,其中很大一部分将会发生在发展中国家,同样在中国恶性肿瘤发病率和死亡率均呈快速增加的趋势。据近年的统计资料表明，恶性肿瘤的死亡率约为143/10万，男性中恶性肿瘤死亡率比女性高，分别为169/10万和106/10万,生活水平较差的农村地区恶性肿瘤占死亡原因的第三位，死亡率为[3，4]107/10万，男性为134/10万，女性为79/10万。在恶性肿中胃癌是常见的消化道恶性疾病之一,全球每年有近100万新增加胃癌病例，其中约40万新增病例(近40％)发生在我国，按照死亡率顺序排列，中[5]国危害最严重的恶性肿瘤中胃癌居第一位。胃癌的流行病学调查报道，中国胃癌的患病率和胃癌的死亡率是世界平均水平的2倍多，每2-3分钟就有1人因胃[6，7]癌而死亡。近年来胃癌诊断和治疗水平有了很大的提高，尤其是胃癌的早期诊断率和治愈率有了明显提高，早期胃癌的主要治疗手段仍是以手术切除治疗为[8]主，但对于一些中晚期胃癌，即使能够手术治疗，往往疗效欠佳，术后5年的[9]生存率仅为20％~30%，术后复发和转移是导致死亡的主要原因,深入研究胃癌的发病机制，对提高胃癌的治愈率和生存率、降低死亡率具有十分重要的意义。大量研究表明，细胞的异常增殖以及有关细胞凋亡抑制的肿瘤基因的异常表达与胃癌的发生、发展过程有密切的关系，而且一些肿瘤基因在胃癌组织中的异常表[10]达与胃癌的转移以及术后的复发有重要的因果关系。嗜铬粒蛋白A（CgA）及凋亡抑制蛋白（Survivin）是目前肿瘤学研究中的两个热点，大量研究证实CgA、Survivin在多种恶性肿瘤的发生及发展过程中发[11-15]挥着重要作用。CgA是一种由439个氨基酸组成的酸性亲水性蛋白质，是神经肽类家族中的一员,可用于神经内分泌肿瘤的诊断和有助于治疗。神经内分泌细胞不仅广泛地存在于机体的内分泌器官组织中，也存在于肿瘤和非内分泌器官中，是一种能够分泌肽类物质或特殊胺的细胞。研究表明CgA在大肠癌、肝癌、前列腺癌、乳腺4万方数据 延边大学硕士学位论文[16]癌等恶性肿瘤中也均呈现高表达，但目前有关CgA在胃癌发病机制中的研究报道较少。Survivin是目前为止发现的最强的细胞凋亡抑制因子，研究发现该因子与肿瘤的发生以及肿瘤细胞中淋巴转移、预后有着密切的联系。Survivin经过抑制细胞凋亡和促进细胞增殖使肿瘤细胞恶性增殖并易于发生转移，但其具体分[17]子机制目前还不明确。恶性肿瘤的发生、发展过程是比较精细且又复杂的，整个过程中表现为多步骤、多因素、多基因的协同作用，其中有着很多的抑癌基因、癌基因的突变以及各种因子的参与和作用及其产生的各种酶之间的各种化学变化。CgA和Survivin在肿瘤细胞发生、发展以及肿瘤组织细胞的增殖、迁移浸润、及正常细胞的凋亡等这些过程中都发挥重要的作用，可作为高特异性，高敏感度[18]的一种肿瘤标记物用于肿瘤的诊断和评估预后。迄今为止许多的实验研究只单独的对CgA和Survivin或与其它因子一起在胃癌组织中的阳性表达进行检测，但此二者的联合实验检测以及二者在胃癌发病机制中的相关性研究报道尚少。本实验采用免疫组化染色方法，观察Survivin与CgA在胃癌组织中的表达，探讨两者在胃癌的发生、发展、转移过程中的作用，为胃癌的诊断、治疗及预后评估提供实验依据。5万方数据 延边大学硕士学位论文第一章材料和方法1.1研究资料选取2008年5月至2013年5月在本院外科手术切除的胃癌标本共120例，均经病理证实，术前未经过任何抗癌治疗。全部标本用10%的福尔马林固定、常规石蜡包埋和切片。1.2仪器和设备PHY-III病理组织漂烘仪（常州市中威电子仪器有限公司）；莱卡全自动切片机（德国Leica公司，RM2255）；电热恒温培养箱（上海跃进医用光学器械厂，DNP-9162）；芬兰Biohit百得单道微量可调加样器；电热恒温隔水式培养箱（恒丰医疗器械公司）；数码显微成像装置（日本Olympus公司，DP21）；光学显微镜（日本Olympus公司，CX41）。微量振荡器（锡山市金城仪器厂，WIS-IIIA）；超纯水机(杭州万洁水处理设备有限公司WJ-RO-20)；高压锅；电冰箱；1.3试剂兔抗人嗜铬素A(ChrA)多克隆抗体(工作液6ml)（北京中杉金桥生物技术有限公司）兔抗人Survivin单克隆抗体(工作液6ml)（北京中杉金桥生物技术有限公司）；封闭用正常山羊血清工作液6ml（北京中杉金桥生物技术有限公司）；生物素化通用二抗工作液6ml（北京中杉金桥生物技术有限公司）；辣根酶标记链霉卵白素工作液6ml（北京中杉金桥生物技术有限公司）；3%H2O2去离子水6ml（北京中杉金桥生物技术有限公司）；DAB1ml浓缩液（北京中杉金桥生物技术有限公司）；6万方数据 延边大学硕士学位论文20mlDAB底物液（北京中杉金桥生物技术有限公司）；需要配置的溶液:枸橼酸钠抗原修复液(PH值:6.0)，PBS缓冲液，稀释后使用(PH值:7.4)；延边大学附属医院病理科实验室提供的实验试剂有：二甲苯试剂、无水乙醇试剂、苏木素试剂、85%与95%浓度的酒精。1.4方法1.4.1免疫组化学法染色方法（中杉SP6000）采用免疫组织化学染色法观察CgA与Survivin在胃癌及癌旁组织中的表达,分析CgA和Survivin表达与胃癌的TNM分期和病理分级关系。(1)防脱处理载玻片:载玻片用调配好的防脱剂处理，在适度比例的稀释液中放置30秒。取出后，用PHY-III病理组织漂烘仪烘干载玻片后，然后用蒸馏水或丙酮清洗，以此来去除掉残存的防脱剂。然后在PHY-III病理组织漂烘仪再次上烘干即可。这一步应注意载玻片上是否有气泡残留。(2)固定标本:用10%中性福尔马林固定液来固定标本，然后用石蜡包埋，连续切片，每片厚度约为4μm，在已经制备好的防脱载玻片上把完整的标本选择出来贴附于上面，用68℃的恒温箱供烤半小时。(3)脱蜡病理切片:把制作好的病理切片放于立式架中置于68℃恒温箱里过夜。第2日，在二甲苯试剂中浸泡10min→二甲苯中浸泡10min→无水乙醇试剂中浸泡10min2次→95%浓度的酒精浸泡10min→85%浓度的酒精浸泡10min→自来水冲洗3min→PBS清洗3次，每次3min。(4)高压热修复:将高压锅内盛有柠檬酸盐缓冲液（PH值为6.0）放置于电炉上，加热至95℃。将装有组织切片的立式染色架放于柠檬酸缓冲液中，并完全浸没，盖上锅盖，待出气口喷气后，可达到工作的温度和压力，持续3分钟后，移开火源，待放完高压锅内蒸汽后打开锅盖，自然冷却至室温。然后取出切片标本用准备好的PBS试剂液冲洗3次，每次3min。(5)内源性过氧化物酶活性的阻断:等待标本冷却后（与室温相当），在每一张切片标本上分别滴加1滴3%H2O2去离子水后，放置于室温中等待孵育15min，7万方数据 延边大学硕士学位论文此步是为了灭活内源性过氧化物酶活性，用PBS试剂液冲洗3次，每次3min。(6)一抗体的滴加：小心除去每张载片组织周围的水分后，滴加试剂A（山羊血清工作液）后放置室温10分钟后，滴加一抗体兔抗人嗜铬素A(ChrA)多克隆抗体工作液及兔抗人Survivin单克隆抗体工作液，令其均匀分布后置再放置于准备好的湿盒中，放入4°C冰箱过夜。以PBS代替一抗阴性对照。(7)第二抗体的滴加:第2天，把装有病理切片的湿盒，放置于室温下恢复至常温，PBS缓冲液冲洗3次，每次3min。把每张载玻片周围的液体擦干后擦干后，分别滴加生物素化通用二抗工作液1滴，放室温10~15min后，用PBS缓冲液冲洗3次，每次3min。(8)在每片载玻上组织上滴加1滴辣根酶标记链霉卵白素工作液后，于室温（或37℃）孵育10~15min，然后再用PBS冲洗3次，每次时间为3min。(9)DAB工作液配置：在1毫升试剂DAB底物缓冲液中，加入1滴（约50微升）DAB浓缩液,混合均匀。（该溶液只能现用现配，配好后避光放置保存，6小时内使用，剩余的液体应弃去）(10)显色剂显色：在室温闭光的环境中，小心的除去每张载片组织周围的水分后，把新鲜配制好的DAB显色试剂液分别滴加1滴于每张载玻片的病理组织上，待其分布均匀后，在显微镜下观察，以控制其显色的时间，待显色后用蒸馏水冲洗使其停止继续反应。(Survivin显色时间约为3分钟，CgA显色时间约为2分钟)。(11)复染：将玻片置于苏木素试剂中复染约1分钟左右后，再用蒸馏水冲洗。（12）脱水：常规酒精脱水，二甲苯透明。（13）封片：选择适当的封片滴加中性树胶封片。（14）显微镜下观片。（15）与已知阳性切片做对照。注：因一抗、二抗为工作液，无需稀释。1.5结果判定CgA在细胞浆呈棕黄色为阳性表达，Survivin在细胞浆与细胞核呈棕黄色为阳性表达，每例切片选择染色均匀的5个视野，在高倍镜下记数1000个细胞，记录阳性的细胞数，计算阳性细胞的百分率。8万方数据 延边大学硕士学位论文1.6统计学处理采用统计学SPSS17.0软件进行统计学分析，计数资料用卡方检验(Fisher-Exact)，P<0.05或P<0.01差异有意义。9万方数据 延边大学硕士学位论文第二章：结果2.1临床资料120例中男性病例为98例，女性病例为22例；年龄在36岁~78岁之间，平均为57岁。均为腺癌，其中高分化腺癌21例，中分化腺癌68例，低分化腺癌31例；侵及浆膜者72例，未侵及浆膜者48例；有淋巴结转移者44例，无淋巴结转移者76例，有远处转移者11例，无远处转移者109例；Ⅰ期18例，Ⅱ期43例，Ⅲ期45例，Ⅳ期14例。2.2CgA与Survivin在胃癌与癌旁组织中的表达CgA蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为46.67%，在癌旁组织中的表达率为5.83%；Survivin在胃癌组织中的阳性表达率为52.50%，在癌旁组织中的表达率为9.17%，均有显著性差异(P<0.01)。表1.CgA与Survivin在胃癌与癌旁组织中的表达CGA表达（%）Survivin表达（%）组别n+-P+-P癌组织12056（46.67）64（53.33）<0.0163（52.50）57（47.50）<0.01癌旁组织1207（5.83）113（94.62）11（9.17）109（90.83）2检验*P＜0.0110万方数据 延边大学硕士学位论文CgA与Survivin在胃癌与癌旁组织中的表达120癌旁组织100癌旁组织表达80率%60癌组织40癌组织表达率20%0图一：CgA与Survivin在胃癌与癌旁组织的表达2.3CgA与Survivin表达与胃癌临床病理参数的关系CgA蛋白的表达与性别、年龄、部位无关（P＞0.05），与肿瘤浸润深度、有否淋巴结转移、远处转移、分期分化有关（P＜0.01)；Survivin蛋白的表达与性别、年龄、部位无关（P＞0.05），与肿瘤浸润深度、是否有淋巴结转移、远处转移、分期分化有关（P＜0.01)。表2.CgA与Survivin表达与胃癌临床病理参数的关系临床病理参数NCgA表达（%）Survivin表达（%）+-P+-P性别男9846(46.94)52＞0.0550(51.02)48＞0.05女2210(54.55)1213(59.09)9年龄（岁）≥606731(46.27)36＞0.0534(50.75)33＞0.05＜605325(47.17)2829(54.72)24肿瘤部位胃底208(40.00)12＞0.059(45.00)11＞0.05胃体3115(48.39)1617(54.84)14胃窦6933(47.83)3637(53.62)32浸润深度未侵及浆膜4810(20.83)38＜0.058(16.67)40＜0.0511万方数据 延边大学硕士学位论文侵及浆膜7246(63.89)2655(76.39)17淋巴结转移无7621(27.63)55＜0.0524(31.58)52＜0.05有4435(79.55)939(88.64)5远处转移无10946(42.20)63＜0.0152(47.71)57＜0.01有1110(90.91)111(100.00)0TNM分期Ⅰ+Ⅱ6126(46.62)35＜0.0528(45.90)33＜0.05Ⅲ+Ⅳ5930(50.85)2935(59.32)24分化程度高+中8939(43.82)50＜0.0543(48.31)46＜0.05低分化3117(54.84)1420(64.52)112检验*P＜0.01，*P＜0.05图二：CgA与Survivin在不同性别中的表达12万方数据 延边大学硕士学位论文图三：CgA在不同肿瘤部位的表达图四：Survivin在不同肿瘤部位的表达13万方数据 延边大学硕士学位论文图五：CgA与Survivin表达与胃癌淋巴结转移之间的关系图六：CgA与Survivin表达与胃癌淋巴结有无远处转移之间的关系14万方数据 延边大学硕士学位论文图七：CgA与Survivin表达与胃癌分化程度之间的关系2.4CgA与Survivin的相关性56例CgA表达阳性标本中Survivin表达阳性率85.7%（48/56），阴性14.3%（8/56）；64例CgA表达阴性标本中Survivin表达阳率23.4%（15/64），阴性76.6%（49/64），用Spearma相关分析r=0.42，P＜0.01，CgA与Survivin的表达水平之间呈正相关。表3.CgA与Survivin表达的相关性CgANSurvivin＋(%)Survivin－(%)CgA（＋）5685.714.3CgA（－）6423.476.6Total12052.547.5Spearman相关分析r=0.42，*P＜0.0115万方数据 延边大学硕士学位论文CgA与Survivin的相关性100.0080.00Survivin+%60.0040.0020.000.00Survivin-%CgA+CgA-图八：CgA与Survivin的相关性16万方数据 延边大学硕士学位论文2.5附图：Survivin在低分化癌旁组织中的表达（－）（x400）Survivin在粘液腺癌组织中的表达(＋（)x100）Survivin在粘液腺癌组织中的表达(＋)（x400）Survivin在低分化腺癌组织中的表达(＋)（x100）Survivin在低分化粘液腺癌组织中的表达(＋（)x400）CGA在低分化癌旁组织中的表达(－)（x400）17万方数据 延边大学硕士学位论文CGA在低分化腺癌及癌旁组织中的表达（x100）CGA在低分化腺癌组织中的表达(＋)（x100）CGA在低分化腺癌组织中的表达(＋)（x400）CGA在低分化癌旁组织中的表达(－)（x100）CGA在低分化癌旁组织中的表达(－)（x400）CGA在低分化腺癌组织中的表达(＋)（x100）18万方数据 延边大学硕士学位论文CgA在低分化腺癌组织中的表达(＋)（x400）19万方数据 延边大学硕士学位论文第三章讨论在恶性肿瘤疾病中，胃癌是最为常见的消化道恶性疾病之一。全球每年大约有将近100万人的新增胃癌病例，其中大约有40万个新发病例发生(40％)在我[5]国。流行病学资料显示，我国胃癌的患病率和胃癌的死亡率是世界平均水平的[6-7]2倍还要多，约每两到三分钟就有1个人死于胃癌。目前胃癌的主要诊断方法是影象学检查，胃镜检查以及活检病理检查，胃癌的发生是一个渐进的过程，在胃癌发生的初期或癌前期，胃镜下观察不到明显病变时往往无法得到及时的诊断，以致错过最佳的手术时机。在治疗方面，手术切除治疗仍是目前根治早期胃癌的主要手段，但并非所有患者就诊时都是早期胃癌，相当多的患者确诊时已属中晚期，对于这部分病人，即使能够进行手术治疗，也往往效果欠佳，常在术后1-2年内复发和发生转移，是胃癌死亡的主要原因。化疗虽然对胃癌有一定的治疗效果，但个体差异很大。从理论上讲，生物靶向治疗具有针对性强、目标明确的特点，应该具有较好的疗效，但在实际应用中，找到合适的攻击靶点十分困难，目前，有关胃癌的生物靶向治疗尚处于摸索阶段。因此，研究胃癌的发病机制，[19]对胃癌的早期诊断和治疗具有重要的临床意义。CgA被认为是存在于多种恶性肿瘤组织中的神经内分泌标志物，最初发现其在神经内分泌肿瘤中大量存在，后来的研究发现，其在一些内分泌肿瘤以外的恶性肿瘤如肝癌、胆管癌、前列腺癌及大肠癌中也均存在，CgA阳性表达的恶性肿瘤恶性程度高，易发生转移。CgA参与恶性肿瘤的发病机制有多种途径，CgA蛋白本身含有钙离子结合位点、多聚谷氨酸和碱性氨基酸，也可释放一些具有生物[20]活性的肽类物质，可以和一些功能蛋白结合。一组对直肠癌的研究结果发现:CgA可在翻译或翻译后阶段影响P53蛋白的表达、改变其某些结构和功能，改变后的P53蛋白因不能与TATA-结合蛋白竞争COX-2启动子上的结合位点而促进COX-2表达。另外，CgA还可上调EGFR表达，多项研究表明COX-2和EGFR表[21]达的上调与多种恶性肿瘤的发生和转移有关。本实验结果表明，CgA在胃癌组织中的阳性表达率为46.67%，在癌旁组织中的表达为5.83%，即CgA在胃癌组织中高表达，在癌旁正常组织中低表达，统计学分析结果有显著性差异，这就提示CgA与胃癌的发生过程有某种关联，研究结20万方数据 延边大学硕士学位论文果显示，CgA的表达与肿瘤淋巴结转移、远处转移、浸润深度、分期分化有关，与部位、性别、年龄无关，进一步说明CgA不仅参与了胃癌的发生而且与胃癌的发展和转移有着较为密切的关系，这一结果与CgA在大肠癌及前列腺癌中的研究[22]结果相似。鉴于CgA可由具有神经内分泌功能的细胞分泌，而CgA表达阳性的胃癌组织具有一定的分泌CgA的功能，因此，我们可通过测定血液中的CgA水平来为早期胃癌的诊断提供帮助，当然，由于CgA在多种恶性肿瘤中存在高表达，仅靠CgA一个指标还不能完全作为早期胃癌筛选依据，需要与其它指标联合应[23]用，目前有学者开始这方面的工作，并取得了一定进展。Survivin是由Ambzosini等于1997年用效应蛋白酶受体－1的cDNA在人类基因库中筛选克隆出的基因，它定位于染色体17q25上，由142个氨基酸组成，[24]存在于同源二聚体形式，于细胞周期G2/M期表达。在胚胎发育时期Survivin表达广泛，除胸腺等组织外,在正常分化的成人组织中表达较少，在正常情况下[25]即使增生较为活跃的组织中也不易检测到。生物学功能主要有:①调节染色体的分离和胞质分裂，抑制细胞凋亡。通过抑制凋亡caspase3和7去影响Fas介导的信号传导，最终导致肿瘤的发生。②对肿瘤新生血管生成的促进作用:VEGF有促内皮细胞的功能，Survivin的高表达能保护和维持该功能，促进了肿瘤的[26]血管生成与浸润转移，Daniel等的研究报道也指出显著表达的Survivin参与了三维血管网的形成。它能选择性表达于恶性肿瘤组织，从而使细胞恶性转化和抑制细胞凋亡，这也是恶性肿瘤发生的重要因素之一。研究表明：从正常的胃组织发展到最终癌变的整个疾病演变过程中，Survivin[27][28]都起到了较为重要的作用。孙迪文等人利用免疫组织化学SABC法检验出了在正常的胃黏膜组织Survivin的阳性表达率为0%，在轻、中、重度不典型增生组织Survivin的阳性表达率分别为5.25%，6.32%，8.57%。在不完全型大肠化生与早期胃癌组织中Survivin的阳性表达率分别为65.73%、68.51%，在胃癌发生和发展过程中Survivin这种表达率呈逐渐增高趋势的特性，可以做为胃癌疾病早期诊断和早期预警的一个有重要意义的分子辅助指标。有关Survivin在胃癌不同临床病理分期中表达的研究较少，且结论不一致，[29]Chun等报道，随着肿瘤分化程度的降低，Survivin的表达水平逐渐升高，也和是否有淋巴结转移相关，无淋巴结转移组的阳性表达率要明显低于有淋巴转移21万方数据 延边大学硕士学位论文[30]组的阳性表达率，但与患者的性别、年龄和大体类型均无关系。Suburaya等在对25例胃癌患者的病理标本运用RT-PCR方法观察了Survivin的表达情况后发现：胃癌的浸润深度以及腹膜转移程度都与Survivin阳性表达率之间有着较为密切的相关性，但是与是否有淋巴结转移的胃癌组织以及胃癌组织的分级没有明显的关系。本实验结果显示：Survivin在胃癌组织中的阳性表达率为52.50%（63/120），在癌旁组织中的表达为9.17%（11/120），均有显著性差异，表明Survivin在胃癌组织中高表达，在癌旁正常组织中低表达，与已有的研究报道基本相符，Survivin表达与性别、年龄、部位无关，与肿瘤浸润深度、有否淋巴结转移、远处转移、分期分化有关，这一结果提示在胃癌的整个发生过程中Survivin不仅参与着，而且与胃癌的发展和转移也密切相关。本实验还重点研究了CgA与Survivin在胃癌组织中表达的相关性，结果显示：56例CgA表达阳性标本中Survivin表达阳性率85.7%，阴性14.3%；64例CgA表达阴性标本中Survivin表达阳率23.4%，阴性76.6%，Spearman相关分析显示二者表达呈明显正相关。这一结果提示我们，CgA可能通过对Survivin表达的影响这一途径而参与了胃癌的发生、发展和转移过程。虽然CgA与Survivin在胃癌组织中都呈现高表达，而且与胃癌的分期、分化、转移相关，但是CgA作为一种具有内分泌功能的细胞的标记物，其不仅存在于胃癌等一些恶性肿瘤组织中，而且还存在于肾上腺等一些内分泌器官的细胞中，不适合作为胃[31]癌靶向治疗的攻击靶点。本实验结果进一步提示，CgA可能通过对Survivin表达的影响这一途径而参与了胃癌的发生、发展和转移过程，因而干预Survivin可以在一定程度上间接起到干预CgA的作用。Survivin经过促进细胞增殖与抑制细胞凋亡这两个过程，使恶性肿瘤细胞增殖，而在正常胃粘膜组织中的表达率几乎没有，使Survivin有望成为胃癌基因靶向治疗新靶点。本实验通过对胃癌不同病理参数条件下CgA和Survivin表达的研究可以初步得到如下结果：1、CgA与Survivin在胃癌组织中高表达，在癌旁正常组织中低表达。2.CgA与Survivin的表达与胃癌患者的性别、年龄、部位无关，与胃癌的TNM分期和病理分级有关，CgA、Survivin均参与了胃癌的发生、发展和转移过程。3.CgA在胃癌组织中的表达与Survivin表达呈正相关，提示CgA可能通过对Survivin表达的影响这一新发现的途径而参与了胃癌的发生、发展和转移过程。4、Survivin在癌组22万方数据 延边大学硕士学位论文织中高表达，在癌旁及其它正常组织中低表达甚至不表达的特性，有望使其成为胃癌靶向治疗的新靶点。23万方数据 延边大学硕士学位论文结论1.CgA和Survivin阳性表达与胃癌的TNM分期和病理分级有关。2..CgA和Survivin在胃癌的发生、发展过程中发挥协同作用。3.Survivin有望成为胃癌靶向治疗的新的靶点。24万方数据 延边大学硕士学位论文参考文献[1]KulendranM,LeffDR,KerrK,etal.Globalcancerburdenandsustainablehealthdevelopment[J].TheLancet,2013,381(9865):427-429.[2]LeeYY,JunJK,SuhM,etal.BarrierstoCancerScreeningamongMedicalAidProgramRecipientsintheRepublicofKorea:AQualitativeStudy[J].AsianPacificJournalofCancerPrevention,2014,15(2):589-594.[3]陈万青,张思维,郑荣寿,等.中国2009年恶性肿瘤发病和死亡分析[J].中国肿瘤,2013(1):2-12.[4]ZhaoP,DaiM,ChenW,etal.CancertrendsinChina[J].Japanesejournalofclinicaloncology,2010,40(4):281-285.[5]ParkinDM.Epidemiologyofcancer:globalpatternsandtrends[J].Toxicologyletters,1998,102:227-234.[6]陈万青,张思维,郑荣寿,等.中国2009年恶性肿瘤发病和死亡分析[J].中国肿瘤,2013(1):2-12.[7]杨中行,卜世崇.全胃切除空肠P袢代胃术治疗胃底贲门癌的效果评价[J].中国实用医药,2013(3):80-81.[8]LeeDY,HongSW,ChangYG,etal.Clinicalsignificanceofpreoperativeinflammatoryparametersingastriccancerpatients[J].Journalofgastriccancer,2013,13(2):111-116.[9]HamiltonSR，AltonenLA.Pathologyandgenetics.Tumorsofthedigestivesystem.WHO，2000，53.[10]VoliniaS,CalinGA,LiuCG,etal.AmicroRNAexpressionsignatureofhumansolidtumorsdefinescancergenetargets[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica,2006,103(7):2257-2261.[11]WangK,ChenX,YanF,etal.5′-Triphosphate-siRNAAgainstSurvivinGeneInducesInterferonProductionandInhibitsProliferationofLungCancerCellsInVitro[J].JournalofImmunotherapy,2013,36(5):294-304.[12]XueH,ChenY,CaiX,etal.Thecombinedeffectofsurvivin-targetedshRNAand25万方数据 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延边大学硕士学位论文lesions[J].WorldJGastroentero1,200915(32):4055-4061.[26]Tsuburaya,Noguchi,YoshikawaT,etal.Anti一apoptosisgene,Survivinandtelomeraseexpressioningastriccaneer[J].EurJGastroenterolHepato1,2006,18:957一963.[27]OlieRA,Simões-WüstAP,BaumannB,etal.Anovelantisenseoligonucleotidetargetingsurvivinexpressioninducesapoptosisandsensitizeslungcancercellstochemotherapy[J].CancerResearch,2000,60(11):2805-2809.[28]孙迪文,陈启.Survivin在早期胃癌及癌前病变组织中的表达及其与PTEN表达的关系[J].实用癌症杂志,2008,23(1):28-30.[29]Chun-LiDa,YanXin,JingZhao,etal.Significanceandrelationshipbet--weenYes-associatedproteinandsurvivinexpressioningastriccarcinomaandprecancerouslesions[J].WorldJGastroentero1,200915(32):4055-4061.[30]Tsuburaya,Noguchi,YoshikawaT,etal.Anti一apoptosisgene,Survivinandtelomeraseexpressioningastriccaneer[J].EurJGastroenterolHepato1,2006,18:957一963.[31]冯超,李汉忠,严维刚,等.嗜铬素A和突触素在肾上腺肿瘤中的表达及其临床意义[J].中华肿瘤杂志,2005,27(8):486-488.27万方数据 延边大学硕士学位论文[综述]CgA和Survivin在肿瘤中的研究进展张恩含综述李林虎审校恶性肿瘤的流行学调查表明，在1990年前肺癌、胃癌、乳腺癌、结直肠癌和肝癌排在发病前五位，2000年前是肺癌、乳腺癌、结直肠癌、胃癌和肝癌排在发病前五位，而2012年前是肺癌、胃癌、肝癌、结直肠癌和乳腺癌排在发病[1]前五位。WHO全球监测数据显示：2013年全球癌症新发病例1500万，死亡790万，每8个死亡病例中就有1例是癌症患者。从目前总体的癌症发病情况看，肺癌一直排在第一位，第二位的就是胃癌。全球恶性肿瘤流行现状应该得到大家的关注，据相关部门预测，到2020年，全球恶性肿瘤的新发病人数将会达到2000万人左右。死亡的病例将会增加到1200万人左右。癌症将成为威胁人类健康的第一杀手，也是全球将要面对的最大生命安全问题。WHO警示，如若不采取有效的措施，依此种趋势发展下去，在2030年全球将会增加2600万人的癌症病例，因癌症而死亡的人数将会快速跃至1700多万人，而其中很大部分将会发生在以[2]中、低等收入水平的发展中国家。在我国，据近年的恶性肿瘤资料统计显示，约为137/10万的死亡率，其中男性癌症患者的死亡率约为169/10万，女性癌症患者的死亡率约为106/10万，男性高于女性。在我国恶性肿瘤中，按其危害程度排列，胃癌居于首位。依次分析出我国恶性肿瘤的发病率及死亡率的趋势都在[3，4]快速增长着。在恶性肿瘤疾病中，胃癌是最常见的消化道疾病之一。全球每年都会有将近[5]100万人的新增加胃癌病例，其中大约有40万个新增病例(近40％)在我们国家。有关医学研究人员在胃癌方面曾调查报导:中国胃癌的发病率和死亡率是世界平[6，7]均水平的2倍，每两到三分钟就有1人因胃癌而死亡。依此来看，相比其他的国家，中国的胃癌患者总体的的发展趋势已经是非常的不容乐观。很多年来，各个国家政府都在医疗方面不断的加大投入，总体上令治疗、诊断的水平有了很大的提高，尤其使胃癌早期的诊断率和治愈率有了明显提高。但到目前为止，胃28万方数据 延边大学硕士学位论文[8]癌的确切发病机制仍然不是十分的确定，手术切除治疗仍是目前根治早期胃癌的主要方案与手段。因为很多的患者在发现胃癌时都是比较的晚，所以使其大多数人一经发现已属于晚期胃癌，虽然最终经手术治疗，但往往最终疗效欠佳，术[9]后5年的生存率也不高，仅为20％~30%。术后复发和转移是导致死亡的主要原因,深入研究胃癌的发病机制，对提高胃癌的治愈率和生存率、降低死亡率具有十分重要的意义。大量研究表明，细胞的异常增殖以及有关细胞凋亡抑制的肿瘤基因的异常表达与胃癌的发生、发展过程有密切的关系，而且一些肿瘤基因在[10]胃癌组织中的异常表达与胃癌的转移以及术后的复发有重要的因果关系。嗜铬粒蛋白A（CgA）及凋亡抑制蛋白（Survivin）是目前肿瘤学研究中的两个热点，大量研究证实CgA、Survivin在多种恶性肿瘤的发生及发展过程中发[11]挥着重要作用。CgA是一种由439个氨基酸组成的酸性亲水性蛋白质，是神经肽类家族中的一员,可用于神经内分泌肿瘤的诊断和有助于治疗。神经内分泌细胞不仅广泛地存在于机体的内分泌器官组织中，也存在于肿瘤和非内分泌器官中，是一种能够[12]分泌肽类物质或特殊胺的细胞。Survivin是目前为止发现的最强的细胞凋亡抑制因子，研究发现该因子与肿瘤的发生以及肿瘤细胞中淋巴转移、预后有着密切的联系。Survivin经过抑制细胞凋亡和促进细胞增殖使肿瘤细胞恶性增殖并易于发生转移，但其具体分子机制目前还不明确。恶性肿瘤的发生、发展过程是比较精细且又复杂的，整个过程中表现为多步骤、多因素、多基因的协同作用，其中有着很多的抑癌基因、癌基因的突变以及各种因子的参与和作用及其产生的各种酶之间的各种化学变化。CgA和Survivin在肿瘤细胞发生、发展以及肿瘤组织细胞的增殖、迁移浸润、及正常细胞的凋亡等这些过程中都发挥重要的作用，可[13]作为高特异性，高敏感度的一种肿瘤标记物用于肿瘤的诊断和评估预后。本文就CgA和Survivin对恶性肿瘤细胞的发生，发展，浸润及转移等过程中的表达及意义简要的作一综述。一、CgACgA对很多的恶性肿瘤疾病都有着较高的诊断价值，如：在胃癌、前列腺癌、胰岛素瘤、胃泌素瘤、嗜铬细胞瘤、肺癌、心血管疾病中的发生、发展中都29万方数据 延边大学硕士学位论文[14]发挥着重要的作用，因为它是非特异性肿瘤的标志物。1.1CgA的结构及特性CgA由439个氨基酸组成，分子质量48000，是一种酸性、亲水蛋白质，是神经肽类家族中重要的成员之一，在神经内分泌系统内广泛分布。CgA在神经[15，16]内分泌肿瘤诊断中的价值，使其在心血管疾病中也越来越受到关注。最早的CgA基因是从人胎肝基因库中分离出来的。在人及动物中，CgA的等电点、分子大小、免疫抗原表位以及位于N末端和C末端的区域等方面都具有着高度的[17]保守性，序列高度同源。CgA最早发现存在于肾上腺嗜铬粒细胞的分泌颗粒中，目前知道在所有的神经内分泌细胞中，能分泌儿茶酚胺的囊泡中都存在着[18]CgA。近些年研究人员发现了该蛋白不仅存在于心肌、交感神经末梢中，另外[19]还发现在胰腺、周围神经系统、甲状腺组织、肠道内分泌等组织内也存在。细2+胞内CgA的生物学功能主要有2个:参与Ca及儿茶酚胺代谢和增加高尔基网的通透性。对高尔基网膜上的靶肽激素和神经递质的聚集进行选择性调节。CgA的蛋白水解酶还不仅有组织特异性还具有着不同的蛋白酶水解位点。血管抑制因子-1，-2、胰抑素是目前已证实的在不同组织中能够被分解成不同组织特异性的主要3个片段。其中儿茶酚抑素和血管抑制因子-1，分别发挥着不同的意[20]义与作用。1.2CgA与肿瘤1.2.1CgA与神经内分泌肿瘤存在神经内分泌肿瘤时，CgA在血浆中的水平一般都会升高。目前研究得出[21]结论：基本上血浆CgA的水平在所有类型的神经内分泌肿瘤中都会出现升高，CgA作为非特异性肿瘤标志物，对肿瘤的诊断具有重要的价值。血浆CgA的浓度超过500600U/L是推断神经内分泌肿瘤究竟是发生转移和局灶性的重要依[22]据。Oberg等研究人员发现经手术治疗后的患者，其神经内分泌肿瘤血浆CgA的浓度水平则会随之相应的得到降低。因此，CgA不仅可以作为神经内分泌肿瘤辅助诊断的标志物，而且还能够在肿瘤的发展进程中，使其对动态监测和预后作一辅助指标。在良性的功能性肿瘤和嗜铬细胞瘤方面，检测24小时尿5-轻基30万方数据 延边大学硕士学位论文叫味乙酸(5-HIaa)的灵敏性没有CgA的灵敏性更高，因此CgA可首选为临床检[23]验的指标。1.2.2CgA与前列腺癌[24]Berruti等研究人员发现，在前列腺癌组织中的神经内分泌细胞中，CgA作为血清标志物可以成为前列腺癌的辅助诊断指标。的升高对前列腺癌疾病的变化过程有着预测的作用。但是血浆CgA升高不为前列腺癌所特有，因为在神经内分泌细胞分泌中，CgA是一种特殊产物，在所有的内分泌瘤中基本都会表现出CgA血浆水平升高，因此以此作为辅助标准在临床上做联合检测前列腺特异性抗原及CgA，对评价及诊断前列腺癌的预后会有一定的临床意义。王明、蔡[25]运林等研究发现，对进展期远处转移的前列腺癌和前列腺的特异性抗原阴性监测及诊断，血浆CgA水平浓度的高低具有重要的意义，可用于前列腺癌的诊断。另CgA作为内分泌细胞的血清标志物，可给伴有转移性前列腺癌的患者或前列腺癌的患者的诊断和预后做一重要的辅助指标。这将会在临床上有重要的意义与作用。1.2.3CgA与嗜铬细胞瘤常发生于肾上腺的嗜铬细胞瘤是一种少见的疾病，恶性率占到10%~20%，[26]多以良性多见。目前多根据尿儿茶酚胺及其代谢物的水平，来诊断嗜铬细胞瘤，[27]但因其特异性低使其较易受到自身条件以及各种药物的影响。因CgA在检测时，该蛋白的分泌不容易受到药物的影响，故可用于辅助嗜铬细胞瘤诊断的指标[28][29]。张利朝等研究人员研究发现CgA在肾上腺髓质的分布特点可以用来鉴别嗜铬细胞瘤及肾上腺髓质组织的增生与嗜铬细胞癌疾病。并提示在内分泌学基础上肾上腺皮和髓质之间相互调节。血浆中的甲氧基肾上腺素的水平及肿瘤组织的大小与CgA的表达量呈正相关性，恶性嗜铬细胞瘤，可能血清CgA明显升高。[30]冯超等发现，恶性嗜铬细胞瘤可能性与CgA强阳性表达成正相关，可用来预防肿瘤的复发和监测治疗的效果。1.2.4CgA与非小细胞肺癌鳞癌、大细胞癌、肺腺癌等非小细胞肺癌都有神经内分泌分化。CgA与非[31]小细胞肺癌中的神经分泌也相关，也可作为辅助指标用来监测神经内分泌化。31万方数据 延边大学硕士学位论文1.2.5CgA与内分泌肿瘤胃肠胰腺内分泌肿瘤均和CgA关系密切，其血浆CGA水平可作为预后不良[32][15]的指标。杨晓鸥等研究人员发现对诊断胃泌素瘤有较高敏感性的血浆CgA，在胃肠胰腺神经内分泌肿瘤中，血浆CgA的水平明显升高，故可作为评价预后和监测肿瘤发展的指标。另外还对37名嗜铬细胞瘤疾病患者和39名胃肠胰腺内分泌肿瘤疾病患者的血浆CgA水平运用CELISA(酶联免疫吸附测定法)做了检验，以正常人和非内分泌肿瘤消化道疾病患者各自选出30名来对比参照，把研究血浆中CgA的水平作为目的，以此测出对诊断胃肠胰腺内分泌肿瘤组织的临界点，以及探讨了该实验对诊断的价值及意义。最终实验结果表明:正常对照组(86，135和30U/L对20U/L，P<0.001)的血浆CgA水平明显低于其它三组。30U/L为诊断CgA的临界点，80.0%的敏感度，96.7%的特异性。因此，在神经内分泌肿瘤尤其是胃、肠、胰腺的内分泌肿瘤中，血浆CgA水平都具有着较高的诊断价值。1.2.6CgA与其他肿瘤[33]Noble等研究人员研究发现对鉴别异位促肾上腺皮质激素肿瘤，CgA的水平明显升高有着重要的意义。CgA还能够表达肺硬化性血管瘤中。CgA和癌胚[34]抗原125两者联合一起检测，有助于鉴别妇科卵巢肿瘤的是否良性。邓承慧等研究人员还发现慢性肾脏病的分期与CgA也有着密切的关联。1.2.7CgA与心血管疾病CgA是神经内分泌活性的强有力指标。在CgA与心血管疾病之间的关系方面，大量科学人员研究出了较多的成就。如有关报导：在漫性心力衰竭患者中其[35]心力衰竭增加幅度和严重程度与CgA的水平有着密切的相关性。张雯等研究人员还检测了49例B型利钠肽和血浆CgA水平的慢性心力衰竭患者，发现心力衰竭患者血浆b型利钠肽及血浆中CgA水平升高的程度较为明显，和心功能NYHA分级以及心力衰竭严重的程度关系较为密切，表明在慢性心力衰竭患者[36]中CgA是该疾病的独立预测因子。Omland等人还对119例心肌梗死患者用了10.8a进行了密切的跟踪与随访分析显示：心肌梗死后患者病死率的增加与血浆中CgA水平的高低具有相关性。校正前升高约10ng/mI，死亡风险比为1.22，校32万方数据 延边大学硕士学位论文正后升高10ng/mI时，死亡风险比为1.17。从而提示出心肌梗死后的患者病死率[37]与血浆中的CgA升高密切相关。Pieroni等研究证实了脑钠素的水平与血浆中[38]的CgA水平呈正相关。谢烨卿等人在研究中采用了免疫组织化学的方法证实了扩张型心肌病患者血浆中的CgA水平升高比较显著。在扩张型心肌病患者的血液循环及心肌中的表达CgA都均有升高，提示CgA不仅与其病程相关，还参[16]与了扩张型心肌病的发生。1.2.8CgA的其他作用在精神压力评定中，CgA能够成为肾上腺素的替代品，不仅参与了组织修复，还具有抑制细胞凋亡，调节机体内能量代谢，机体炎症反应的抑制，平衡细[39]胞内外的钙，儿茶酚胺释放的抑制等诸多作用。在神经内分泌分化的组织中，CgA是特异、敏感和可靠的标志物，对肿瘤的分型、诊断和预后均有着重要的[40]意义。二、SurvivinAmbrosini等研究人员在1997年，利用效应细胞蛋白酶受体-1的cDNA把Survivin（抑制凋亡蛋白）从人类基因组库的杂交筛选中分离出来。Survive的别名又称为生存素，是到目前为止，发现的凋亡抑制因子中最强的一个，也是IAP家族的新成员，是唯一一个能够通过内源性抑制Caspase活性而抑制细胞凋亡的因子。有着肿瘤的特异性的Survivin只表达于胚胎组织和肿瘤，在成人的成熟分化组织中表达比较低或者不表达，而在人类的发育着的胚儿组织以及胚胎组织中表达度比较高，在恶性肿瘤组织中也高表达，如肺癌组织中，结肠癌组织中，肝癌和前列腺癌以及胰腺癌组织中等，并和癌组织的临床病理分级、分期等特征有[41]着较为密切的关联，故可参考作为这些恶性肿瘤的独立预后辅助指标。2.1Survivin结构在人体中Survivin定位于染色体的17q25上，相对分子质量为16kDa，由142个氨基酸组成。抑制凋亡蛋白类家族中每个成员的IAP重复区序列都是由2~3个串联的组氨酸/含半胱氨酸的杆状病毒构成。主要是BIR发挥抗凋亡作用，其中与此相邻的梭基末端还含有一个锌指结构。而在抑制凋亡蛋白类家族中，作33万方数据 延边大学硕士学位论文为新成员的Survivin的功能区却只有单一的BIR，没有锌指结构，只有交织螺旋结构替代，从而使其结构比较的独特。Survivin主要表达于细胞G2/M期，在细胞纺锤体上起作用。Survivin蛋白与纺锤体在有丝分裂前期时，利用微管结构相互之间发生作用，来对G2/M期稽查点的效应做出对抗，并共同抑制了casPase3和7的活性，为了在G2/M时期让更多的肿瘤细胞通过稽查点，而抑制肿瘤细胞的凋亡，并对来自于因基因突变诱导的细胞凋亡做出对抗，使其发挥抗凋亡的作[42-44]用，从而使肿瘤组织细胞产生病理性的分裂增殖。2.2Survivin的生物学功能2.2.1Survivin与凋亡Survivin不仅通过多种途径来抑制细胞的凋亡，而且它还是极强的凋亡抑制因子；Survivin在细胞内能与细胞周期调节蛋白（CDK4）结合，使Rb磷酸化和CDK2激活，加快DNA的复制，进而缩短细胞周期的进程；在细胞凋亡信号诱导细胞凋亡中效应蛋白酶（Caspase）家族起到了主要的作用和机制，在蛋白酶（Caspase）家族中到目前为止已经发现了10余种，其中Caspase3是细胞凋亡中比较关键的一个因子，与线粒体内的结构p21waf1/cip结合后失去活性。当在某些因素刺激作用下Survivin的表达增高时，结合CDK4形成复合体，把p21waf1/cip从中释放出来，再一次的p21waf1/cip与CasPase3相结合，抑制凋亡及使其失去活性；Survivin蛋白与纺锤体在有丝分裂前期时，利用微管结构相互之间发生特异性作用，致使casPase7和casPase3的活性得到抑制，从而抑制细胞的凋亡；Survivin对抗其协助凋亡功能主要是通过结合smac/diablo凋亡蛋白，启动凋亡程序，参与激活caspase-9，与Survivin结合后启动凋亡程序产生拮抗作用；bax细胞的凋亡、抗癌药物的诱导以及Fas的细胞凋亡以及Apaf-1的激活和线粒[45]体细胞色素c的释放中Survivin都起到了抑制的作用。2.2.2Survivin在血管中作用在肿瘤的整个发生发展过程中，淋巴管和血管形成的整个过程中的核心就是淋巴管、血管内皮细胞的增殖。血管形成的先决条件就是血管内皮细胞的增殖与凋亡的平衡。血管形成素-1(Ang-1)是血管内皮细胞的特异性配体，血管形成在[46]胚胎时期时，起到的重要作用是维持血管管腔形成与血管腔的稳定。据有报道：34万方数据 延边大学硕士学位论文Survivin参与了血管的形成过程。Survivin的表达上调给血管形成素-1(Ang-1)[47]发挥作用提供了依靠。VEGF(血管内皮生长因子)的作用有|：增加血管的通透性。促进肿瘤的侵袭、转移。诱导微血管形成，对血管内皮细胞有着特异性。VEGF与肿瘤组织的的转移预后及复发有着密切的关系。有相关报道：在VEGF介导的血管内皮细胞保护过程中Survivin起到了关键作用。VEGF在淋巴管、肿瘤血管生成过程中的抗凋亡作用，Survivin的高表达对其有着重要的促进作用。Survivin能够维持和保护因化疗药物而遭到破坏的微小管网的结构以及因该药物对血管内皮细胞的有促凋亡作用的逆向增进了VEGF的血管、淋巴管内[48，49]皮细胞保护功能，从而使肿瘤组织的抗药性得到增加。2.2.3Survivin与胃肠道恶性肿瘤胃癌的形成是由正常的胃黏膜经由浅表性胃炎发展慢性萎缩性胃炎，再到肠化和非典型的增生，最后发展到胃癌。此过程分为多个步骤与多个阶段，相互参与，不仅精细且又较为复杂。另有关研究人员还发现在胃癌组织中发展过程中的[50]不同阶段与不同时期，抑制凋亡蛋白Survivin都有着分别不同的阳性表达率。研究人员孙迪文等人利用免疫组织化学SABC法检验出了在正常的胃黏膜组织Survivin的阳性表达率分别为0%。Survivin在轻、中、重度不典型增生组织中的阳性表达率为5.25%，，6.32%，8.57%。在不完全型大肠化生与早期胃癌组织中Survivin的阳性表达率分别为65.73%、68.51%，其结果都不同程度的呈现明[51]显出了增强的趋势。关于Survivin在胃癌不同临床病理分期的表达等方面的相[52]关研究报导，目前结论还暂不统一。Chun等人通过研究还发现，随着肿瘤分化程度的降低，Survivin的表达水平逐渐升高，也和是否有淋巴结转移的关系也[53]很密切。但是TSuburaya等研究人员在对25例胃癌患者的病理标本运用RT-PCR方法观察了Survivin的表达情况后发现：胃癌的浸润深度以及腹膜转移程度都与Survivin阳性表达率之间有着较为密切的相关性，但是与是否有淋巴结转移的胃癌组织以及胃癌组织的分级没有明显的关系。另有研究表明：可以在肿瘤患者血清中用利用间接的ELISA方法从中检测出Survivin，从而进一步利用其[54]做出对肿瘤的诊断。目前的大部分胃癌的诊断标准都是在胃镜下探视下取出病理做活检，但整个过程患者必须忍受做胃镜所带来的痛苦。有研究人员发现可利用实时定量聚合酶链32反应检测胃癌患者血清中的Survivin基因的表达，有可35万方数据 延边大学硕士学位论文[55]能避免因做胃镜检查时胃镜对黏膜组织的损伤而给患者带来的痛苦。但此类的相关方向还有待于进一步的探索研究。对于胃癌预后的判断Survivin有着重要[56]的作用。在胃癌组织中Survivin的高表达率是通过促进细胞增殖和抑制细胞凋亡来实现肿瘤细胞的恶性增殖，但在正常的胃粘膜组织里基本不表达，这促使Survivin成为了较为理想的肿瘤基因靶向治疗的靶点。抑制凋亡蛋白（Survivin）基因靶向治主要是疗针对肿瘤细胞，抑制其增殖并促使其凋亡，而不影响正常的[56]细胞活性，这是其所特有的优势。Survivin基因靶向治疗治疗包括:核酶、RNA干扰、反义Survivin等。基因靶向治疗所具有的优势使Survivin对胃癌的新治[57]疗方式的研究具有了重要的意义。另外，Survivin亦可作为一个肿瘤标志物应[58]用于肿瘤早期的检测和筛查，可作为胃癌患者预后的辅助诊断。三展望CgA是对神经内分泌肿瘤诊断有较高诊断价值的非特异性肿瘤标志物。虽然我们目前对CgA研究与探讨都有了很多的成果，但依旧存在着很多的问题等待着我们去解决，比如CgA在肿瘤细胞中的表达升高的机制，实验只能证明其在很多肿瘤中都表达有所上升，以及CgA在肿瘤组织细胞中的发生发展中起一定的作用，但其机制及作用的具体方面还有着很多的待未探明的空间。Survivin经过抑制细胞凋亡和促进细胞增殖来使肿瘤细胞恶性增殖，便利了肿瘤细胞的增殖转移，但Survivin具体的分子机制过程目前还是不能够得到明确的答案。肿瘤组织的整个发生发展的过程是比较精细且又复杂的，整个过程中表现为多步骤、多因素、多基因的协同作用，其中有着很多的抑癌基因、癌基因的突变以及各种因子的参与和作用及产生各种酶之间的各种化学变化。CgA和Survivin在肿瘤细胞发生、发展以及肿瘤组织细胞的增殖、迁移浸润、及正常细胞的凋亡等这些过程中都发挥着较为重要的作用，故可作为高特异性，高敏感度的一种肿瘤标记物来为肿瘤的诊断做服务。到目前为止许多的实验研究只是单独的对CgA和Survivin或与其它因子一起在胃癌组织中的阳性表达进行检测，但此二者的联合实验检测以及二者在胃癌发病机制中的相关性研究还尚未见报导。通过免疫组化实验法对二者的联合检测，其实验结果应该对胃癌的初步诊断具有一定的辅助作用，以此来进一步减少不必要的误诊，争取做到早诊断、早干预，根据不同的发36万方数据 延边大学硕士学位论文病机制有针对的进行治疗，对提高治愈率和生存率、降低死亡率具有十分重要的意义。37万方数据 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延边大学硕士学位论文致谢本论文是在李林虎老师的精心指导和大力支持下完成的。感谢李林虎老师在我研究生期间对我的细心指导和培养，他渊博的知识开阔的视野，深深的启迪了我。三年的研究生时间里，李老师每天都以严谨态度和敬业的精神深深的影响着我，定将对我以后的工作与学习产生深远的影响，我再次向敬爱的李老师表示衷心的感谢！感谢这三年来延边医院普一科所有的医护老师对我工作专业技能以及生活中为人处事能力的精心培养，你们在学业上的细心关心与指导必将为我以后的工作和继续学习打下了夯实的基础，你们所有的宝贵的临床工作经验的灌注，都将是我一生的财富。在这里我要向诸位老师深深的鞠上一躬！感谢延边大学附属医院病理科朴东明教授、金仁顺教授以及各位病理科老师对我实验的支持，在步骤方法等方面使我节省了大量时间。感谢延边大学临床学院、医院各级领导、研究生处、科教处各位老师的教育与培养。感谢我的同学们三年来对我的包容与关怀！感谢家人三年来对我的理解、鼓励和支持！衷心感谢本次论文评审和答辩审查的各位专家老师们，你们辛苦了！再一次对所有教导、帮助、关心过我的人表示衷心的感谢！最后，祝所有老师、同学们永远快乐、一生平安！谢谢！43万方数据