hif1α和survivin在胃癌组织中的表达

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1、HIF1α和survivin在胃癌组织中的表达【摘要】目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF1α)和凋亡抑制蛋白survivin在胃癌发展过程中的意义及其对肿瘤血管生成的影响.方法:应用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测HIF1α和survivin在70例胃癌组织、14例癌旁组织和15例正常组织中的表达,并计数CD105标记癌组织的微血管密度（MVD）.结果:HIF1α和survivin在胃癌组织中的表达明显高于正常组织及癌旁组织（P＜0.05）；HIF1α和survivin的表达均与胃癌的浸润深度、临床分期及局部淋巴结转移之间存在相关性（P<0.05）；HIF1α和su

2、rvivin表达阳性组的MVD均高于各自的阴性组（P<0.05）；HIF1α和survivin在胃癌中表达存在正相关性（r=0.285,P<0.05）.结论：HIF1α和survivin在胃癌的发展和转移过程中具有重要意义；联合检测两者的表达可用于评价胃癌的恶性生物学行为.【关键词】胃肿瘤缺氧诱导因子1αsurvivinCD105　　0引言　　多数肿瘤的生长具有缺氧的微环境,肿瘤形成的关键步骤就是对缺氧的适应,缺氧诱导因子1α（hypoxiainduciblefactor1alpha，HIF1α）是细胞适应缺氧而产生的一种核转录因子.在多种恶性肿瘤如肠癌、乳腺癌、

3、肺癌等组织中，HIF1α均有过度表达并参与肿瘤血管形成［1］.CD105是一种新型的血管内皮标记物,参与血管生成,在标记肿瘤相关的新生血管内皮上具有更高的特异性［2］.本实验对70例胃癌、14例癌旁组织、15例正常组织中的HIF1α、凋亡抑制基因及CD105标记的癌组织的微血管密度（MVD）进行了检测，旨在探讨胃癌发生发展过程中因缺氧而造成的HIF1α的表达以及其对肿瘤血管形成的影响，为临床治疗新靶点提供依据.　　1材料和方法　　1．1材料兰州大学第一附属医院2003/2005外科手术切除胃腺癌石蜡包埋标本70（男39,女31）例,年龄26～74（平均55.6）岁.其中高分化21例

4、，中分化30例，低分化19例.浸润程度:粘膜层18例，肌层33例,达浆膜层19例.淋巴结转移31例，未转移的39例.另取该组胃腺癌病例中肿瘤手术切除标本切缘处正常胃粘膜(病理证实)石蜡包埋标本15例及癌旁粘膜14例作为对照.浓缩型兔抗人HIF1α多克隆抗体购自美国SantaCruz公司,工作浓度为1∶150；即用型survivin和CD105鼠抗人单克隆抗体及SP试剂盒均购自北京中杉公司.　　1.2方法　　1.2.1染色方法已知阳性切片做阳性对照，以PBS代替一抗作空白对照.福尔马林固定胃腺癌标本，石蜡切片58℃烤4h，常规脱蜡至水，抗原修复（98℃）20min，PBS洗3×3min.

5、3mL/LH2O2抑制内源性过氧化物酶，室温20min，PBS洗3×3min，滴加二抗正常血清，室温孵育10min，不洗切片分别滴加浓缩型兔抗人HIF1α多克隆抗体(1∶150）、即用型survivin和CD105鼠抗人单克隆抗体于温盒内37℃,1h，PBS洗3×3min，滴加二抗，温盒内37℃，10min，PBS洗3×3min，DAB显色8～10min，自来水终止反应，苏木精衬染60s，水洗蓝化，常规脱水树胶封片.　　1.2.2结果判断HIF1α，survivin阳性染色为淡黄色、棕黄色或棕褐色，采用二级计分法，即以染色强度与阳性细胞的百分比的乘积做为半定量标准：染色强度：0分为无

6、色；1分为黄色；2分为棕黄色；3分为棕褐色（深浅与背景色相对比）.阳性细胞所占的百分比：阳性细胞≤10%为1分；10%～50%为2分；51%～75%为3分；>75%为4分.染色强度与阳性细胞所占的百分比的乘积0～3分为阴性（-）；>3分为免疫反应阳性（+）［3］.　　1.2.3MVD计数以CD105为血管标记物的MVD计数参照VD间的关系CD105所标记的新生血管分布不均匀,大多局限于肿瘤实质的边缘(图1).新生血管呈点、线、簇状结构,有管腔样结构形成,腔不规则,壁薄无平滑肌形成,癌旁正常组织的血管内皮大多呈阴性,极少数血管呈微弱的阳性.70例胃癌组织HIF1α或survi

7、vin表达阳性组的MVD值显著高于HIF1α或survivin表达阴性组，其差异均有统计学意义［(15.6±3.6)vs(13.4±2.8),(15.9±4.2)vs(13.7±2.9),P<0.05］.　　3讨论　　HIF1缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体细胞中,由HIF1α和HIF1β构成异二聚体,其中HIF1α是主要的氧调节亚基.HIF1α具有广泛的靶基因谱，可启动多种基因的转录，其功能涉及到肿瘤血管生成，