采用变性梯度凝胶电泳技术研究不同形态玉米日粮对鹅肠道微生物区系的影响

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1、动物营养学报2010，22(1)：169．175ChineseJournalofAnimalNutrition采用变性梯度凝胶电泳技术研究不同形态玉米日粮对鹅肠道微生物区系的影响胡平施寿荣王志跃H刘蓓一杨海明孑L祥玲(1．扬州大学动物科学与技术学院，扬州225009；2．中国农业科学院家禽研究所，扬州225003)摘要：本研究旨在研究不同形态玉米日粮对鹅肠道微生物区系的影响。选用7日龄扬州鹅192只，随机分成4组，每组4个重复，每个重复12只，在日粮组成相同的情况下，分别饲喂粉状玉米日粮、粉状玉米一整粒玉米日粮、整粒玉米一粉状玉米日粮、整粒玉米日粮。8

2、4日龄时从肠道内容物中提取基因组总DNA，利用细菌通用引物对细菌16SrDNA的V3区进行PCR扩增，扩增产物经变性梯度凝胶电泳(DGGE)后进行图谱分析。结果表明，整粒玉米日粮可以导致空肠细菌种类的下降和回肠细菌种类的增加，对十二指肠和盲肠微生物区系影响不明显。研究表明，玉米日粮形态能够影响鹅肠道菌群分布，其中，对空肠和回肠影响较大，对直肠的影响次之，对十二指肠和盲肠影响较小。关键词：整粒玉米；鹅；微生物区系；变性梯度凝胶电泳中图分类号：S835；$811．3文献标识码：A文章编号：1006．267X(2010)01—0169．07消化道微生物在营养

3、物质消化吸收、机体免疫、用此技术，研究在日粮组成相同的情况下，饲料中玉生长代谢和疾病防治等方面均发挥着重要作用口]。米粉碎与否对鹅肠道微生物区系产生的影响，探讨用日粮是消化道微生物最终代谢底物的来源2]，其成PCR-DGGE技术研究鹅肠道微生物区系的可行性。分和营养水平的改变能够显著影响消化道菌群的种类和数量l3j。因此，消化道微生物的多样性间接反1材料与方法映了日粮饲喂效果的好坏。有关饲料形态对动物生1．1试验设计与饲养管理产性能和消化道的影响国内外学者已有一些研究，选择健康、体重基本一致的7日龄扬州鹅192其中Wang等利用变性梯度凝胶电泳(den

4、atu．只，随机分成4组，每组4个重复，每个重复12只ringgradientgelelectrophoresis，DGGE)和(公母各占1／2)。4个组的日粮组成及营养水平(见16SrDNA序列分析技术研究猪结肠和粪便细菌的表1)都一致，仅是玉米形态的差别，整粒玉米配合多样性，结论表明，饲喂整粒稻谷可以刺激部分菌种日粮指日粮中玉米为整粒状，其余成分都为粉状；粉的生长，但不影响主要菌群结构。Gabriel等对肉状玉米配合日粮中玉米过2mm直径筛，其余成分鸡的研究发现，饲喂整粒小麦主要导致消化道前段为粉状，具体试验设计见表2。雏鹅采用网上平养，(肌胃和胰

5、腺)的变化，对小肠和大肠的影响很小。自由采食饮水，常规免疫程序，29日龄后采用地面鹅的相关研究中，孔祥玲等将整粒玉米和粉碎玉平养。米配制日粮饲喂鹅，发现整粒玉米日粮可提高鹅的1．2样品收集饲料转化率。但是，关于饲料形态对鹅肠道微生物84日龄时宰杀试验鹅，每组取5只，无菌操作，区系的影响还没有学者进行过研究。传统方法在分分离十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠，取各肠段内析肠道菌群上存在多种缺陷，分子生物学技术的出容物，将同组5只鹅相同肠段的内容物混合均匀，迅现加快了胃肠道微生态学的研究进展，其中PCR—速置于一70℃保存备测。DGGE技术因能够全面准确地分

6、析复杂微生物群落的结构和多样性，而得到广泛的应用。本试验采收稿日期：2009—08—16基金项目：江苏省科技支撑计划(BE2009351)，国家现代水禽产业技术体系专项作者简介：胡~-(1983一)，女，江苏沭阳人，硕士，主要从事动物营养与饲料科学研究。E．mail：gxahpl21@126．corn*通讯作者：王志跃，教授，E—mail：dkwzy@263．net170动物营养学报22卷”每千克预混料含有Providedperkgofpremix：VA1200000IU；VD400000IU；VE1800IU；VK150mg；VB160mg；VBz6

7、00mg；VB6100mg；VB121mg；烟酸nicotinicacid3mg；D一泛酸D-patothenicacid900mg；叶酸folicacid5Omg；生物素biotin4mg；胆碱choline35g；Fe6g；Cu1g；Mn9．5g；Zn9g；I50mg；Se30mg。。’营养水平为计算值。Nutrientlevelswerethecalculatedvalues．表2试验设计Table2Experimentaldesign1．3试验方法甲基溴化铵(CTAB，2％)，37℃温育1h，再加入1．3．1肠道微生物总DNA提取600L溶菌酶

8、(10mg／mL)，37℃温育1h，取出置采用酶解+物理、化学裂解法相结合的方法，具于液氮冷冻