鲍曼不动杆菌院内感染及耐药性传播机制研究

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1、温州I医学院硕jl：学位论文答辩委员会主席：答辩委员会成员：论文答辩日期：知·弓．艿．夕歹1温州医学院硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7正文第一部分院内感染鲍曼不动杆菌的耐药性调查材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14第二部分鲍曼不动杆菌的分子流行病学调查材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17结果⋯⋯···⋯··⋯··⋯⋯⋯⋯··

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯··19分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22温州医学院硕．t：学位论文第三部分鲍曼不动杆菌的生物膜形成能力及耐药性传播机制研究材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34全文小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37附录一中英文对照缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41附录二实验设计方案⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42附录三在

3、校期间参与课题和发表论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯68温州医学院硕士学位论文鲍曼不动杆菌院内感染及耐药性传播机制研究中文摘要目的以浙江省七家地区代表性医院临床分离的院内感染鲍曼不动杆菌为研究对象，了解鲍曼不动杆菌院内感染现状及耐药性分布特征，找出主要的流行克隆株并研究其耐药性传播机制。方法1．细菌培养：将保存合格的398株临床分离株自一80℃超低温冰箱中取出，置于室温融化复苏后，在生物安全柜操作

4、台上采用三区划线法接种于羊血琼脂平板，放入35℃恒温培养箱孵育过夜。2．细菌鉴定：从羊血琼脂平板上挑取单个菌落，VITEK-32型全自动微生物分析仪自动鉴定。3．细菌鉴定复核：由VITEK一32型全自动微生物分析仪鉴定的鲍曼不动菌，经PCR扩增16SrDNA测序复核确定菌种为鲍曼不动杆菌。4．抗菌药物敏感性试验：采用琼脂稀释法测定398株院内感染鲍曼不动杆菌对15种抗菌药物的MIC值，结果判定为敏感、中介、耐药。判定标准参照2010年美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准。5．脉冲场凝胶电泳(PFGE)：参照病原菌分子分型实验室监测国际网络PluseNet公

5、布的鲍曼不动杆菌的标准化PFGE分子分型方案。鲍曼不动杆菌菌株用ApaI酶切，标准菌株H9812用XbaI酶切。采用PFGE398株鲍曼不动杆菌进行分子分型。6．多位点序列分型(MLST)：根据PFGE结果从各地区挑选主要流行克隆株，进行MLST试验。应用eBURST程序将STs归为谱系(clonalcomplex)，采用UPGMA方法构建系统进化树，采用SplitsTree软件构建ST型亲缘关系树。7．生物膜形成试验：采用96孔板结晶紫染色法检测鲍曼不动杆菌在LB培养基中生物膜的形成能力。参照Stepanovic等的评估方法，将菌株生物膜形成能力分为四类，运

6、用SPSSl1．0分别对细菌的耐药率与生物膜形成能力进行相关性分析。8．质粒接合转移试验：选取每个地区的主要流行克隆株进行质粒接合转移试验，温州医学院硕士学位论文对接合子进行质粒提取鉴定、药敏试验研究。结果1．院内感染鲍曼不动杆菌病例以老年患者(年龄>60岁)、呼吸道感染患者及ICU患者居多，分别占38．9496，73．37％和40．95％。2．398例鲍曼不动杆菌对15种常用抗菌药物耐药率超过50％的抗菌药物有11种，占总体的73．33％：对氨苄西林耐药率最高，为95．48％；对B～内酰胺类抗生素普遍耐药，对第三代头孢菌素(头孢噻肟，头孢曲松和头孢他啶)的总

7、耐药率为74．04％，对第四代头孢菌素头孢吡肟的耐药率为57．54％：对头孢哌酮／舒巴坦及碳青霉烯类抗生素耐药率分别为23．62％和29．15％。3．PFGE结果显示398株鲍曼不动杆菌分为31个PFGE型5个主要流行克隆群，A群，236株，占试验菌株数的59．3％，在除宁波、嘉兴外的5个地区均有分布，且均为该地区鲍曼不动杆菌的主要流行克隆株。B群，30株，占试验菌株数的7．5％，其中20株分离自丽水，10株分离白温州和绍兴。C群，2l株，占试验菌株数的5．3％，其中19株分离自宁波，3株分离自杭州。D群，19株，占试验菌株数的4．8％，分离自绍兴和杭州。E群

8、，13株，占试验菌株数的3．3％，分离