重组腺病毒介导的缺氧诱导因子-1α基因对大鼠局灶性脑缺血再灌注后hsp90及caspase-9、caspase-3表达的影响

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1、贵阳医学院2013届硕士研究生论文（《中国图书资料分类法》）分类号：R743单位代码：10660学号：S100186贵阳医学院2013届临床医学硕士专业学位材料(科研论文部分)重组腺病毒介导的缺氧诱导因子-1α基因对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HSP90及caspase-9、caspase-3表达的影响研究生：李亚骐导到师：陶陶教授年年级：2010级专转业：内科学2013年05月17日-0-贵阳医学院2013届硕士研究生论文目录第一部分重组腺病毒介导的缺氧诱导因子-1α基因及重组腺病毒空载体的扩增及测定摘要……………………………………..3缩略词表……………………………………..4前

2、言……………………………………..5材料与方法…………………………………..6结果……………………………………..9讨论……………………………………..10结论……………………………………..11参考文献……………………………………..12实验附图……………………………………..13英文摘要……………………………………..14第二部分重组腺病毒介导的缺氧诱导因子-1α基因对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡相关基因表达的影响摘要……………………………………..15缩略词表……………………………………..17前言……………………………………..18材料与方法……………………………

3、……..19结果……………………………………..31讨论……………………………………..41结论……………………………………..47-1-贵阳医学院2013届硕士研究生论文参考文献……………………………………..48实验附图……………………………………..50英文摘要……………………………………..56致谢………………………………………59论文独创性声明…………………………......60综述…………………………………......61-65-2-贵阳医学院2013届硕士研究生论文重组腺病毒介导的缺氧诱导因子-1α基因对大鼠局灶性脑缺血再灌注后HSP90及capase-9、casp

4、ase-3表达的影响专业内科学研究生李亚骐导师陶陶教授第一部分重组腺病毒介导的缺氧诱导因子-1α基因及重组腺病毒空载体的扩增及测定摘要目的对重组腺病毒进行有效扩增及滴度测定，为大鼠局灶性脑缺血再灌注的重组腺病毒介导的缺氧诱导因-1a（Ad-HIF-1a）基因治疗奠定一定基础。方法采用人胚肾293细胞作为包装细胞，将重组腺病毒缺氧诱导因子-1a（AdHIF-1α）基因及重组腺病毒空载体（Ad）转染入293细胞，通过GFP在荧光显微镜下观察转染效果，将已转染293细胞包装出AdHIF-1a/Ad，并进行扩增及测定病毒滴度，取得进一步实验所需重组腺病毒。结果在荧光显微镜下可见转染后的2

5、93细胞有明显的绿色荧光蛋白，扩增后88AdHIF-1a滴度为：8.2×10pfu/mL，Ad滴度为：8.9×10pfu/mL。结论通过293细胞培养，能将重组腺病毒HIF-1a成功扩增，且扩增后的病毒液量能充分满足体内基因转染实验的需求。关键词重组腺病毒；载体扩增-3-贵阳医学院2013届硕士研究生论文缩略词表英文缩写英文全称中文全称AdRecombinantadenovirusemptyvector重组腺病毒空载体AdHIF-1αRecombinant-adenovirus-mediated重组腺病毒介导的缺氧诱hypoxiainduciblefactor-1alphagen

6、e导因子-1α基因FBSFetalbovineserum胎牛血清GFPGreenfluorescenceprotein绿色荧光蛋白HIF-1Hypoxiainduciblefactor-1缺氧诱导因子-1HIF-1αHypoxiainduciblefactor-1alpha缺氧诱导因子-1αHREHypoxiaresponseelements低氧反应元件-4-贵阳医学院2013届硕士研究生论文前言脑血管疾病是目前危害人类健康的常见疾病，其发病率、致残率、死亡率均呈逐年上升趋势，目前临床常用的内科保守治疗及外科手术（微创、开颅）治疗等均存在一定局限性，临床效果亦欠佳。近年来，基因治

7、疗已成为一种新医疗手段，由最初主要用于遗传相关性疾病的治疗研究逐渐深入医学的各个领域，在其治疗脑缺血性疾病中具有广阔前景，可以为脑缺血后抑制细胞凋亡、促进神经功能恢复提供新的临床思路。目前腺病毒是基因治疗中最常用的载体，且随着对腺病毒分子结构与感染机[1]制的进一步深入探索，对其原有的腺病毒载体进行了一些改进，使具有便于保存、表达时间长、高转染效率、高病毒滴度、转染细胞谱广等优点，能有效地将基因运载至静止期和增殖期细胞中，且携带的外源基因不会整合到宿主基因中。本实验中我们采用了自