重组人血管内皮抑素对白血病k562及k562a02细胞株增殖及凋亡的影响

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1、单位代码10475学号104753101237分类号R733硕士学位论文重组人血管内皮抑素对白血病K562及K562/A02细胞株增殖及凋亡的影响学科、专业：医学院肿瘤学研究方向：血液肿瘤申请学位类别：医学硕士申请人：李亚楠指导教师：房佰俊主任医师二〇一三年五月EFFECTINPROLIFERATIONANDAPOPTOSISOFRECOMBINANTHUMANVASCULARENDOTHELIALONK562ANDK562/A02CELLSOFMYELOIDLEUKEMIAADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniversit

2、yinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByLiYananSupervisor:Prof.FangBaijunDate：MAY,2013关于学位论文独创声明和学术诚信承诺本人向河南大学提出硕士学位申请。本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的，对所研究的课题有新的见解。据我所知，除文中特别加以说明、标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在

3、论文中作了明确的说明并表示了谢意。在此本人郑重承诺：所呈交的学位论文不存在舞弊作伪行为，文责自负。学位申请人（学位论文作者）签名：201年月日关于学位论文著作权使用授权书本人经河南大学审核批准授予硕士学位。作为学位论文的作者，本人完全了解并同意河南大学有关保留、使用学位论文的要求，即河南大学有权向国家图书馆、科研信息机构、数据收集机构和本校图书馆等提供学位论文（纸质文本和电子文本）以供公众检索、查阅。本人授权河南大学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等目的，可以采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手段保存、汇编学位论文（纸质文本和电子文本）。（涉及保密内容的学位论文在解密后适用本授权书

4、）学位获得者（学位论文作者）签名：201年月日学位论文指导教师签名：201年月日中文摘要研究背景慢性粒细胞白血病(ChronicMyelocyticLeukemia,CML)是一种获得性造血干细胞恶性疾病，是最常见的骨髓增殖性疾病。主要特点是t(9;22)q(34;11)基因异位从而导致BCR-ABL融合基因的产生，形成费城染色体为主要特点。BCR-ABL融合基因编码肿瘤蛋白P210BCR-ABL并具有抗凋亡活性。与CML的发病原因有关。甲磺酸伊马替尼（Imatinibmesylate，IM，Gleevec,格列卫)依赖性与非依赖性耐药机制可导致IM治疗失败。第二代第三代酪氨酸激酶抑制剂

5、(TyrosinekinaseInhibitor,TKI)虽已经被FDA批准用于治疗CML，但价格昂贵，所以使用仍有局限性。越来越多的数据显示，新生血管参与了白血病的发生及进展。抗白血病患者骨髓血管新生成为白血病治疗的切入点之一。肿瘤进展直接与细胞的增殖与死亡不平衡有关。细胞凋亡机制的缺陷可导致CML恶性表型的产生。目前已知的抗凋亡蛋白家族中，BCL-2家族成员BCL-XL与BCL-2均为抗细胞凋亡蛋白，在癌症与肿瘤中，BCL-2、BCL-XL均存在过表达现象。目的1.研究重组人血管内皮抑素(RecombinantHumanEndostatin,rhES)对慢性粒细胞白血病细胞株K562

6、及慢性粒细胞白血病多药耐药细胞株K562/A02增殖抑制作用。2.研究K562、K562/A02细胞株经rhES作用后，观察相关凋亡蛋白BCL-2、BCL-XL及血管内皮生长因子VEGF表达的影响。研究方法1.以K562细胞及K562/A02细胞株为实验细胞，放置于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养，直至其生长稳定。显微镜下观察K562及K562/A02细胞的细胞形态、生长状态；计数法绘制细胞生长曲线。2.CCK-8检测0、10、20、50、100、200和400μg/ml的rhES作用K562、K562/A02细胞6-72小时后的细胞活性并计算IC50。3.IC50浓度作为作用浓度作用

7、于K562、K562/A02细胞株，使用流式细胞术检测经rhES作用后K562、K562/A02凋亡率。I4.使用Elisa及实时荧光定量RT-PCR检测BCL-2、BCL-XL、VEGF的表达。结果1.CCK-8结果显示，rhES对K562、K562/A02细胞株有诱导细胞凋亡的作用。K562、K562/A02细胞株24小时后，细胞生长抑制50%的浓度(IC50)为100μg/ml，48小时后细胞生长抑制50%的浓度(IC50)为