猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(prrsv)3′末端非翻译区中调控序列的研究

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1、!"卷#期微生物学报!（"#）：""!’""($%%"年&%月!日!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$!)*+,-./$%%"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（!""#$）%&末端非翻译区中调控序列的研究&，$&&$&孙志，王金勇，张建武，秦爱健，袁世山（&中国农业科学院上海兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心上海分中心农业部动物寄生虫病重点实验室上海$%%$0$）（$扬州大学兽医学院扬州$$#%%1）摘要：以北美株GH

2、HIJ感染性克隆K232$为平台进行反向遗传操作，将0LM4H中的一级结构进行了系列缺失或插入突变，并改变二级结构中的一个保守的茎环结构，构建全长GHHIJ突变体克隆，解析0LM4H突变对病毒感染性的影响，旨在界定调控GHHIJ0LM4H的启动子序列及二级结构，即复制过程中的最小调控元件。以空斑和N,/+?./@-5,+来研究拯救后重组病毒的复制、转录和生长特性，发现重组病毒感染动力学与亲本病毒无可见差别。结果表明GHHIJ0LM4H的#L端可耐受一定数目的核苷酸的缺失（!&@+）与插入（$0@+）突变，但进一步1@+缺失造成保守的环结构突变后就使

3、病毒失去了感染性。证明了这是0LM4H中控制GHHIJ复制过程的的必需序列及二级结构，为进一步解析GHHIJ复制过程的调控元件奠定了基础。关键词：GHHIJ；反向遗传操作；0L非翻译区；基因组复制；K=/9+,/AIA@Q/,<.，GHHI），俗称“蓝耳病”，首先赖着0LM4H精细有序地调节才能完成，但这种推［&］发现

4、于上世纪(%年代末。其致病病原为猪繁殖理尚需进一步试验验证。随着反向遗传系统与呼吸障碍综合征病毒（GHHIJ），于1%年代初相继（H.R./>.W.@.+=*>IA>+.<，HWI）技术的兴起，人们开始分离于欧洲和美国，并迅速的成为危害养猪业的重通过构建HNO病毒基因组的*XNO，获得诸多HNO大疫病。GHHIJ是新成立的套式病毒目病毒的感染性克隆，在此基础上进行反向遗传学操［$］（N=Q,R=/95.>），动脉炎病毒科（O/+./=R=/=Q9.）的成员。作，探讨HNO病毒复制过程的侵入、复制、转录及病动脉炎病毒是一种有囊膜、核衣壳为正二十面体对

5、毒颗粒组装的精细调控机制，以及病毒的致病机理，称的单股正链HNO病毒。GHHIJ全基因组长约进而确定病毒复制的调控元件。本研究利用前期构&#S-，其基因组结构为不分节段、有#L端帽状结构和建的GHHIJ感染性克隆，在其0LM4H的#L端进行了0LK,5A（O）尾的正义HNO。左端#L非编码区一系列的缺失与插入突变，以期鉴定0LM4H核苷酸（M@+/9@>59+.Q/.T=,@，M4H）长为&1%’$$%个核苷酸序列中对病毒转录复制的调控序列与结构，从而确（@B*5.,+=Q.，@+）；右端0LM4H长&&%’&#%@+。像其它定病毒复制、转录的启动

6、子，以便了解GHHIJ复制正链HNO病毒一样，动脉炎病毒的0LM4H对病毒的调控机制。［0］整个复制过程起着重要的调控作用。黄病毒科和’材料和方法冠状病毒科的病毒0LM4H较长，能够独立的构成病［!’6］毒复制所需的顺式调控元件，在马动脉炎病毒’(’突变质粒的构建（;UB=@.9/+./=R=/B>）和GHHIJ中，试验证明其0L端的GHHI北美株全长感染性克隆（W.@-9@S登录顺式调控元件延伸到了上游的核衣壳蛋白（N）编码号：O8&(!$&$）K232$由本研究室构建（袁世山等，未区（)H8"），GHHIJVJ株的0LM4H序列与)H8"中的发

7、表）。利用PB=S2?9@T.突变G2H技术（I+/9+9T.@.）序列互补形成调节复制的二级功能性结构。据报和中间质粒K34!#&，分别构建0LM4H突变的全长感基金项目：国家自然科学基金（0%#0%#(%）；国家重点基础研究发展规划（1"0项目）（$%%#23#$0$%$）"通讯作者。4.5：(67$&7#!%(!&6$；89:：(67$&7#!%(!&6$；;7<9=5：>?=>?9@AB9@C?,+<9=5D*,<作者简介：孙志（&1"1E），男，上海人，研究实习员，主要从事分子病毒学方面的研究。;7<9=5：>B@F?=&1"1($CA9

8、?,,D*,