转bt多年生海岛棉种质创新及抗虫蛋白的嫁接传导研究

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1、分类号UDC$562学学校代码10593学号1031302019彦商火学位论文转房亡多年生海岛棉种质创新及抗虫蛋白的嫁接传导研究靳明凯专业名称作物遗传育种学院名称农学院指导教师周瑞阳教授高国庆研究员申请学位级别硕士论文提交日期2013年6月论文答辩日期2013年5月20日学位授予日期2013年6月答辩委员会主席唐湘如教授论文评阅人双盲评审论文评阅人双盲评审IIIIIIIlUIllUlUIIIY2407283广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研

2、究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩

3、印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：口保密，在年解密后适用授权。因不保密。(请在以上相应方框内打“√”)淼薹主鼯指导教师签名：／扒≈南可慵作者联系电话：肛7卿?巧矽日肌>13．／Ⅺ日期硼睦，．汐电子邮箱：3厉。够孵画獗铆转Bt多年生海岛棉种质创新及抗虫蛋白的嫁接传导研究转历多年生海岛棉种质创新及抗虫蛋白的嫁接传导研究摘要自曰f基因导入棉花品种以来，我国转Bf抗虫棉的推广极大地减轻了农民植棉的劳动强度，受到农民的广泛欢迎。Bt(苏云金芽孢杆菌)基因是近些年来研究比较多的在植物的抗虫方面(尤其

4、是鳞翅目昆虫)发挥重要作用的植物特异性基因。当有害虫侵袭时，便会激活抗虫基因的表达，通过基因的转录、翻译，形成抗虫蛋白，此类蛋白对鳞翅目昆虫具有高毒性，从而提高植物对鳞翅目昆虫的抵抗力，使植物的抗虫性得到综合性改良，是迄今为止最理想的植物抗虫工程基因。本研究从中棉41中克隆了一个Bf基因，然后通过花粉管通道注射法将其转入海岛棉中，并通过中棉41与海岛棉的杂交、中棉41与海岛棉的互相嫁接，以转基因、基因渐渗、蛋白转移多种方式提高海岛棉的抗虫性。主要研究结果分为种质创新和抗虫蛋白嫁接传导两个部分。种质创新部分

5、：1．根据中棉41的曰f基因序列设计特异性引物pl和p2，进行per扩增，得到一个长1824bp的基因。2．将PCR扩增得到的基因片段连接在克隆载体T载体上。3．设计的特异性引物p1和p2分别含有sacl和Bamhl的酶切位点，用sacl和Bamhl分别对连在T载体_k的Bt基因和pnil21质粒进行双酶切，用T4DNAligase连接，构建植物表达载体。4．利用花粉管通道注射法将构建好的载体质粒转入海岛棉，通过kan抗性、pcr筛选鉴定阳性植株。5．通过中棉4l与海岛棉的杂交，杂交F1代的回交与测交等基

6、因渐渗的方式获得具有Bf基因的杂交后代，并通过kan抗性，pcr筛选鉴定阳性植株。抗虫蛋白嫁接传导部分：1．以中棉41与海岛棉品种进行互为砧木，互为接穗的嫁接。2．通过酶联免疫反应检测嫁接植株中海岛棉部分的抗虫蛋白含量，结果显示抗虫I广西大学硕士掌位论文转Bt多年生海岛棉种质创新及抗虫蛋白的嫁接传导研究毒性蛋白确实从中棉41中转移到了海岛棉中。关键词：海岛棉；Bf基因；中棉41；杂交；嫁接；毒蛋白TheResearchofGermplasmInnovationofBtIslandCottonandGraf

7、tedConductionofInsect．-resistantProteinJinMingkai(CollegeofAgriculture，GuangxiUniversity,Nanning530004，China)Abstract：SincetheBtgeneistakedintocotton，thespreadofBtcottoninChinagreatlyreducedthelaborintensityoffarmersplanting，SOitiswidelywelcomedbyfarmers．

8、Btgene(thuringiensis)isaspecificgenesplayanimportantroleinplantinsect．resistant(1epidopteraspecially)whichisstudiedmoreinrecentyears．Wheninsectsattackthecotton，insect—resistantgenewillbeactivatedandexpress．Insect—re