超声靶向破坏微泡促进aav转运影响细胞内吞行为的实验研究

《超声靶向破坏微泡促进aav转运影响细胞内吞行为的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、上海交通大学博士学位论文学校代码10248超声靶向破坏微泡促进AAV转运影响细胞内吞行为的实验研究作者姓名：金利芳指导教师：杜联芳教授学科专业：影像医学与核医学学号：0107249246答辩日期：2013年5月基金项目：国家自然科学基金(No．81000687)国家自然科学基金(No．81171352)上海交通大学博士学位论文学校代码10248超声靶向破坏微泡促进AAV转运影响细胞内吞行为的实验研究作者姓名：金利芳指导教师：杜联芳教授学科专业：影像医学与核医学学号：0107249246申请学位级别：博士研究方向：UTMD介导基因转染培养单位

2、：上海交通大学附属第一人民医院关键词：超声，微泡，腺相关病毒，基因转染，细胞内吞答辩日期：2013年5月基金项目：国家自然科学基金(No．81000687)国家自然科学基金(No．81171352)Schoolcode：10248ShanghaiJiaoTongUniversityDoctoraIDissertationUTMDStimulatesCellularEndocytosisinFacilitationofAAVDeliveryAuthorName：JinLifangSupervisor：DuLianfangResearchFie

3、ld：Number：ImagingandNuclearMedicine0107249246AcademicDegreeRank-DoctorofMedicineResearchDirection：UTⅣD．mediatedGeneTransductionTrainingUnit：KeyWords：RespondentDate：Fundation：ShanghaiJiaotongUniversityAffiliatedFirstPeople’SHospitalUltrasound，Microbubble，Adeno．associatedVir

4、us，GeneTransduction，CellularEndocytosisMay,2013NationalNaturalScienceFoundation(No．81000687and81171352)上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：加I{年夕

5、月歹日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名：铆日期：加f弓年岁月f厂日指导教师签名：蚀面≮乏日期：西’1、年F月l厂日上海交通大学博士学位论文超声靶向破坏微泡促进AAV转运影响细

6、胞内吞行为的实验研究摘要超声靶向破坏微泡(ultrasound．targetedmicrobubbledestruction，UTMD)是一种新的介导基因转染、药物摄取和载体递送的转移技术，具有靶向性、安全性、有效性和操作简便等优点。本课题组前期研究已证实，UTMD可安全、有效增强腺相关病毒(adeno．associatedvirus，AA＼，)体内外转染视网膜色素上皮细胞及组织，同时加快了AAV携带基因的表达。以上结果提示，UTMD不仅促进丸W进入细胞，还可能加快其在细胞内的运输。已有研究发现UTMD通过“声孔效应”促进载体穿过细胞膜进入

7、细胞，但目前尚未见UTMD对细胞内转运影响的相关研究报道。本实验拟利用AAV为载体媒介，针对UTMD作用后细胞内运输行为进行观察和研究，以期进一步探索UTMD的机制，为此技术的拓展及优化应用提供实验基础。第一章UTMD介导AAV为载体的基因转染方案优化目的：优化UTMD参数组合以期实现安全有效促进AAV转染。方法：携绿色荧光蛋白基因的重组2型AAV(rAAV2．EGFP)以浓度梯度自然转染人宫颈癌细胞HeLa，获得量效曲线。以前期研究UTMD优化参数为依据，选择参数包括超声功率、辐照时间、占空比和微泡体积比，罗列可能的6组参数组合，分别介导

8、rAAV2．EGFP转染HeLa细胞。48h后，采用倒置荧光显微镜观察EGFP表达情况，流式细胞仪测定转染效率。采用CCK．8方法检测细胞活性。上海交通大学博士学位论文结果：选择