血清外泌体促小鼠烫伤创面愈合的作用研究

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1、广东药科大学硕士研究生毕业论文分类号：___________密级:__________UDC:___________血清外泌体促小鼠烫伤创面愈合的作用研究姓名：谢正学号：2111540165院系：药学院学位类型：专业学位专业：药学研究方向：外泌体的功能研究导师姓名：毛建文（教授）论文提交日期：2018年5月25日论文答辩日期：2018年5月23日学位授予单位：广东药科大学二○一八年五月广东药科大学硕士研究生毕业论文广东药科大学硕士研究生毕业论文血清外泌体促小鼠烫伤创面愈合的作用研究中文摘要目的：1.确认外泌体是否会促进烫伤创面的愈合。2.初步探讨外泌体促进烫伤创面愈合的相关机制。方法：1.采用

2、试剂盒法分离外泌体，并通过免疫印迹法检测外泌体标志蛋白，透射电镜观察外泌体形态及纳米颗粒跟踪分析仪测定外泌体粒径。2.选取NIH小鼠建立皮肤深二度烫伤模型，通过HE染色判断造模是否成功。3.烫伤皮肤皮下注射血清外泌体，定期测量各组小鼠烫伤区域面积，评估外泌体的疗效。4.取烫伤部位皮肤进行HE染色，观察皮肤组织的病理变化。5.荧光标记法观察外泌体能否进入皮肤组织细胞。6.MTT法检测血清外泌体对成纤维细胞增殖的影响。7.流式细胞术检测血清外泌体对表皮细胞凋亡的影响。8.细胞划痕实验检测血清外泌体对表皮细胞迁移的影响。9.蛋白免疫印迹检测烫伤组，正常组和外泌体组皮肤的AKT磷酸化水平。10.细胞免

3、疫荧光检测血清外泌体对血管内皮细胞VEGF的影响。11.实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测血清外泌体对VEGFmRNA的影响。结果：1.试剂盒法分离的的大鼠血清外泌体均表达外泌体标志蛋白：CD63，HSP70；粒径均一性良好，均127nm左右，呈双层膜结果。2.成功建立小鼠深二度皮肤烫伤模型。血清外泌体可以明显缩小烫伤疤痕的面积。且能有效修复皮肤的附属结构和改善胶原纤维的排列。3.血清外泌体能促进小鼠原代培养成纤维细胞的增殖。4.血清外泌体能促进表皮Hacat细胞的迁移。I广东药科大学硕士研究生毕业论文5.血清外泌体能抑制热损伤诱导的Hacat细胞凋亡。6.血清外泌体能逆转烫伤诱导的皮肤

4、组织AKT去磷酸化。7.血清外泌体能提高血管内皮EA.hy926细胞VEGF蛋白的含量。8.血清外泌体抑制血管内皮EA.hy926细胞的VEGFmRNA的表达。结论：1.血清外泌体能促进烫伤小鼠皮肤的愈合。2.血清外泌体可能通过诱导AKT磷酸化促进细胞增殖和迁移，同时通过VEGF蛋白促血管新生发挥其促创面愈合的作用。关键词：血清外泌体，烫伤，创面愈合，AKT，VEGFTheeffectofserum-derivedexosomesonthewoundhealinginscaldedmiceAbstractObjective：1.Toconfirmwhethertheserum-derivede

5、xosomespromotethehealingofscaldedwound.2.Toinvestigatetheunderlyingmechanismofserum-derivedexosomespromotingthehealingofscaldwound.Methods：1.ElectronmicroscopewasusedtoidentifythemorphologyoftheexosomesextractedfromratserumbyExoQuickreagent.TheexpressionofexosomalmarkerproteinCD63andHSP70wasdetected

6、bywesternblotting.UsingNTAtodetectthediameterofexosome.2.NIHmicewereselectedtoestablishtheskindeeptwodegreescaldmodelofskin.TheHEstainingwasusedtojudgewhetherthemodelwassuccessful.II广东药科大学硕士研究生毕业论文3.Serum-derivedexosomeswereinjectedsubcutaneouslyintothescaldedskin.Thescaldedareasofeachgroupwereregul

7、arlymeasured,andthescaldedskinwasremovedandstainedwithHE.Thepathologicalchangesofskintissuewereobservedbymicroscope,andthecurativeeffectwasevaluated.4.Fluorescencemicroscopewasusedtoobservewhetherthee