缝隙连接蛋白32、36和43介导的痫性发作机制研究

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1、中图分类号UDCR742．1610博士学位论文学校代码10533密级公珏缝隙连接蛋白32、36和43介导的痫性发作机制研究EffectofConnexin32，Connexin36andConnexin43inseizureandthemechanism作者姓名学科专业研究方‘向学院(系、所)指导老师：彭毓菜：临床医学：神经病学：湘雅三医院：宋治教授答辩委员会主席中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位

2、的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：邋日期：卫生L铿月兰日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》+，并通过网络向社会公众提供信息服务。储躲避新签名堑嗍辱世月当4．氨基吡啶体内致病动物模型海马区Cx32、Cx36和Cx43表达变化摘要：目的：观察4．氨基吡啶

3、(4-aminopyridine，4．AP)诱发大鼠痫性发作后海马区缝隙连接蛋白32(Connexin32，Cx32)、缝隙连接蛋白36(Connexin36，Cx36)、缝隙连接蛋白43(Connexin43，Cx43)的mRNA和蛋白表达变化，探讨缝隙连接与痫性发作的关系。方法：55只成年雄性S．D大鼠(体重200．2309)，随机分为对照组和实验组。对照组腹腔注射等量无菌生理盐水，实验组采用腹腔注射小剂量4．AP诱发痫性发作。实验组又分为电极组，2h，8h，24h，48h五个亚组。观察各实验组大鼠致痫后的行为学变化并记录全面性强直．阵挛发作(generalizedtonic—clonic

4、seizure，GTCS)的潜伏期；采用脑电图记录电极组大鼠致痫后的脑电信号变化；应用免疫组织化学染色方法和Westernblot方法测定各组大鼠海马区Cx32、Cx36和Cx43蛋白的表达变化；采用RT—PCR方法测定各组大鼠海马区Cx32、Cx36和Cx43mRNA的表达变化。结果：1．行为学和脑电图结果：实验组造模成功率为88．9％，大鼠出现GTCS的平均潜伏期为32．2+4．8min。脑电图显示致痫后大鼠出现多种形式的痫性放电，包括尖波、棘波和尖慢波。2．免疫组织化学染色结果显示Cx32、Cx36和Cx43广泛分布在大鼠脑组织中。实验组大鼠海马CA3区Cx32、Cx36和Cx43免疫阳

5、性细胞数在致痫后2h较对照组升高(P<0．05)。其中Cx32免疫阳性细胞数在致痫后8h达到峰值(P<0．05)，后逐渐下降，直到致痫后48h仍高于对照组(P

6、32、Cx36和Cx43的mRNA表达在致痫后2h较对照组升高(P<0．05)。其中Cx32mRNA在致痫后8h的表达达到峰值(P<0．05)，后逐渐下降，直到致痫后48h仍高于对照组(P

7、机制。方法：脱颈椎法分离雄性S—D大鼠(体重50。1009)脑组织，制备300lam厚度的海马脑片。采用全细胞盲法膜片钳电流钳模式记录CBX和奎宁对荷包牡丹碱(bicuculline，BMI)及高K+诱发的海马脑片CA3区神经元动作电位的影响。应用高频电刺激海马脑片CA3区神经元诱发长时程增强效应(10ng．termpotentiation，LTP)模拟痫性放电过程，采用电压钳模式记录奎宁对谷氨酸