甜菜银叶病菌的pcr检测

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1、!"卷#期微生物学报%&’(!"-&(##$$"年!月!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$)*+,’#$$"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!甜菜银叶病菌的!"#检测"葛芸英郭坚华""（南京农业大学植物保护学院植物病理系南京#1$$.B）摘要：本研究用1CD4#"D+E-)间的FGD序列通用引物H1（BI4)JGKJG))K))JJG)JKKJG4"I）和H#（BI4JGJKK))JJK)GKK)KK4"）扩增甜菜银叶

2、病菌（!"#$%&’($)#*"+,-’(("+,’(*)./*L(&)$’)，!,&）和其它相近细菌的基因组E-)；并对其MKN产物进行回收、克隆和测序，将所获序列和其它已报道的细菌内源转录间隔区（F+,P=2D*6>=+，FGD）序列进行多重比较后设计出!,&的特异性引物Q1（BI4JJKKGKJGJGGJGKKKGG)GK4"I）和Q#（BI4JGK)KK))GK))4K))KKKJ)J4"I）。此引物可以从!,&中扩增出"0/P*的特异性片段，而其余参试的#1个

3、细菌MKN反应结果均为阴性。该方法可以应用于病害防治工作中的!,&快速、可靠的检测。关键词：甜菜银叶病菌，FGD分析，MKN检测中图分类号：D!"BR"#文献标识码：)文章编号：1$$C4C1/.（#$$"）$#4$#/14$B甜菜银叶病是甜菜生产上的一种严重病害，1.!B年首次在英国被报道，正在世界（包括中国）的许多地方蔓延，其病原为萎蔫短小杆菌甜菜致病变种（!"#$%&’($)#*"+,-’(("+,’0(*)./*L(&)$’)，!,&）。该病原属革兰氏阳性细菌，呈小而不规则的杆状，不产生内生

4、孢子，没有异染粒。该病菌主要危害红甜菜，受侵染植株首先沿叶脉出现银色，很快扩展到整个［1，#］叶片及其它叶片，最后植株萎蔫死亡。在一些田地可以造成高达/BS的损失。本研究依据FGD序列多态性找出了可用于!,&检测的特异性引物，为!,&的快速准确检测提供了必要的基础。$材料和方法$%$参试菌株用于测序的细菌包括萎蔫短小杆菌的C个致病变种；用于MKN扩增的还包括其它植物病原细菌属的模式种、大肠杆菌和一些腐生菌种（见表1）。［"］$%&细菌基因组’()的提取用不同浓度的!E-)作对照，将提取E-)用G3稀

5、释至#$<9T，?#$U保存。"H$%*工具酶、试剂、序列测定和引物合成G6VE-)聚合酶和标准分子量购自G)W)N)公司；2-GM@、*XK4G载体购自D6<9&<公司；玻璃奶回收试剂盒购自博大公司；序列由上海博亚公司测定。"国家自然科学基金（"../$!01）和中国农业科学院植物保护研究所病虫害生物学国家重点实验室#$$1年度开放基金（*2"）资助项目""通讯作者。3456,’：789:&;<76:(=2:(><作者简介：葛芸英（1.//?），女，江苏人，硕士，从事植物细菌的分子检测研究。345

6、6,’：=6@A9AA;A68&&(>&5(><收稿日期：#$$#4$/4##，修回日期：#$$#41#4$.;K;微生物学报>E卷表!参试菌株及来源!"#$%&’()"*+,(%,(%-"+-(.%*)/)*0*+,1"(*++"2%/3,()"*+,452#%)/3,()"*+,6%,/5)7%!"#8$89:8$%&’’"($&’)*+,;<=>?@AB!"#8$89:8-*.&*;?@AB!"#8$89:8/0)+,*..)&,;DE;?@AB!"#8$89:800#.));

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