小麦tambd4基因的克隆、结构及表达的初步分析

《小麦tambd4基因的克隆、结构及表达的初步分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、万方数据20植物生理学通讯第44卷第1期，2008年2月小麦TaMBD4基因的克隆、结构及表达的初步分析孟凡荣·，刘昊英1，司志飞1，尹钧2，李永春2-’河南农业大学1生命科学学院，2国家小麦工程技术研究中心，郑州450002提要：以拟南芥MBD基因的EST为基础，采用电子克隆并结合RT．PCR方法分离克隆了包含开放阅读框的小麦甲基结合域蛋白基因TaMBD4．序列分析显示，TaMBD4蛋白有典型的甲基结合域．组织表达特性分析表明，TaMBD4在干种子和胚乳中的表达量高于其它组织．TaMBD4的eDNA和基因组DNA比较分析显示，此基因包括1个内舍子，进一步分析表明这个内含子为2个GG

2、CAGT序列的串联重复，推测该内含子可能与TaMBD4基因的转录后调控相关．关键词：DNA甲基化；小麦；如jlf8D4；克隆；基因结构和表达PreliminaryStudyonCloning，StructureandExpressionofTaMBD4GeneinWheatMENGFan·Ron91，LIUHao-Yin91，SIZhi．Feil，YINJun2，LIYong-Chun2’’。CollegeofLifeScience,2NationalEngineeringResearchCentreforWheaf’HenanAgriculturalUniversity,Zheng

3、zhou450002,ChinaAbstract：InordertoprovideaninsightintomolecularcharacteristicsandputativeepigeneticfunctionsofMBDinwheat，agenewithcompleteopenreadingframe(ORF)designatedas死d舾回啤wasidentifiedinwheatby拥silicocloningapproachanditsfragmentwasclonedbvRT．PCR．AminoacidsequenceanalysisshowedthatTaMBD4co

4、ntainedaconservedmethyl-CpGbindingdomain．whichmightplayaputativeroleinepigeneticmechanism．SpatialexpressionanalysisshowedthattheexpressionlevelofIaMBD4washigherindryseedsandendospermthanthatinothertissuestested．ThecompartiveanalysisbetweeneDNAandgenomicDNAofthegeneshowedthatashortintronwasinclu

5、ded．Interestingly．wefoundthattheintronwascomposedof2tandemsimplesexluencerepeats．whichmightbeinvolvedintheposttranscriptionalregulationoftheTaMBD4．Keywords：DNAmethylation；wheat；死MBD4：cloning；genomicstructureandexpressionDNA甲基化是生物体内普遍存在的一种基因修饰现象。植物基因组中DNA甲基化一般发生在mCpG、mCpNpG和mCpNpN(N=A、C或T)(Gruen

6、baum等1981；Matzke等1989：Tariq和Paszkowski2004)，在植物组织特异性或发育调控性基因的表达中起重要作用，高等植物细胞在不同的分化与发育阶段具有不同的甲基化模式，DNA甲基化的动态变化是维持植物个体正常生长发育的分子调控机制之--(Cao等2000；Finnegan等2000；Takeda和Paszkowski2006)。已有研究表明，DNA甲基化与基因表达调控密切相关。启动子及基因编码区域的DNA甲基化或脱甲基化可以抑制或激活基因的转录，DNA甲基化调控基因转录的分子机制有2种可能：一是DNA甲基化直接干扰转录因子与启动子的结合(Eden和Ceda

7、r1994)：二是甲基化的DNA上特异结合了甲基结合蛋白(methylationbindingdomainprotein，MBD)，进而召募转录抑制复合体(包括共抑制因子和组蛋白脱乙酰基酶等)，诱发组蛋白的脱乙酰化，导致染色体结构的变化和转录的抑制(Springer和Kaeppler2005：Ballestar和Esteller2005)。多数的实验都支持第2种机制。甲基结合域蛋白MBD是与甲基化DNA特异结合的反式作用因子，在基因表达调控和维持生物体正常