普通小麦春化基因vrn2的克隆及表达特性分析

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1、河南农业大学硕士学位论文普通小麦春化基因VRN2的克隆及表达特性分析姓名：马丽娟申请学位级别：硕士专业：作物栽培学与耕作学指导教师：尹钧；王翔2012052012年河南农业大学硕士毕业论文摘要以6个不同春化发育特性的普通小麦品种为试验材料，通过RT-PCR扩增技术克隆了春化基因VRN2的CCT保守区，分析了保守区43个氨基酸中3个关键位点的突变情况；克隆了6个品种启动子部分区域，分析其序列特征；研究了春化过程中ZCCT基因在辽春10号和京841中的表达特性。主要研究结果如下：1．以6个不同春化发育特性普通小麦品种为试验材料，通过R

2、T-PCR技术克隆了ZCCT-AI朋2、ZCCT-B1／B2和ZCCT-D1／D26个基因编码区，分析了CCT保守区中43个氨基酸16位、35位和39位氨基酸的突变情况。结果表明：不同品种间ZCCT-A1的CCT功能域的序列存在差异，肥麦有R35W突变，辽春10号、郑麦9023、周麦18、豫麦49—198和京841五个品种均有R39C突变；ZCCT-A2均存在R16C突变；B和D组均未发现突变。表明VRN2基因编码区的等位变异主要体现在A染色体组上，而B、D染色体组上的VRN2基因在参试品种中都为显性。2．通过半定量RT-PCR技

3、术，分析了春化过程中强春性辽春10号和冬性京841的ZCCT-AI崩2、ZCCT-B1／B2和ZCCT-D1／D26个基因的表达特性。结果显示：ZCCT-A1／A2的表达均较低，ZCCT-B1／B2和ZCCT-D1／D2随着春化天数的增加，表达量均有逐渐下降趋势，且ZCCT-B1的表达量较高；而且，京841的表达水平显著高于辽春10号，表明在参试品中的冬性品种的VRN2抑制春化作用明显大于春性品种。3．通过PCR特异扩增技术，克隆了6个品种启动子部分区域，分析其序列特征。结果显示：均扩增到目的条带，说明均不是无效形式(nullfo

4、rm)；ZCCT-A1启动子存在3个SNP；ZCCT-D1启动子也存在3个SNP；除郑麦9023外的5个品种ZCCT-A1在启动子上游97bp处有三个连续的TCT重复序列，而6个品种ZCCT-B1启动子上游97bp处有2个连续的TCT序列。6个品种ZCCT-B1缺失一个TCT，推测这一缺失可以作为ZCCT-B1的分子标记，又因这一缺失在启动子区域，与小麦冬性强弱是否存在关系需进一步研究。关键词：普通小麦；春化基因；ZCCT；突变；启动子；表达2012年河南农业大学硕士毕业论文CloningandExpressionofVernal

5、izationGeneVRN2inWheat(TriticumaestivumL．)Supervisor：Prof．YinJunAssociateProf．WangXiangMasterCandidate：MaLi]uanAbstract：Sixwheat(Triticumaestivum)cultivarswithdifferentvernalizationtraitswereanalyzedinthisPaDer．Mutationofthreekeysitesinthe43aminoacidsequencesofthecons

6、ervedCCTdomainIntheZcCT／andZCCT2geneswereanalyzedusingtheRT—PCRamplification．Promoterregionofsixcultivarswereclonedandsequencefeatureswereanalyzed．ThispaperanalyzedexpressionfeaturesotZCcTgenesinvernaliazationprocessofLiaochunl0haoandJin9841．Themainresultsweresummariz

7、edasfollowas：1．Sixwheat(Triticumaestivum)cultivarswithdifferentvernalizationtraitswereanalyzed．Mutationof16／35／39threekeysitesinthe43aminoacidsequencesoftheconservedCCTdomainIntheZCCT—Al，A2、ZCCT。Bl／B2andZCCT—DI／D2geneswereanalyzedusingtheRT．PCRamplification．Theresults

8、showedthat6cultivarshaddifferentmutationinCCTdomainofZ(’(?一爿1gene，FeimaihadR35Wmutation，theotherfivecultivarshadR39Cmutation