神经生长因子和银杏达莫预处理对乳鼠离体脑片谷氨酸和过氧化氢不同损伤保护作用的比较研究

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1、贵阳医学院2013届硕士研究生论文《中国图书资料分类法》分类号：R743.31单位代码：10660学号：S0100365贵阳医学院2013届硕士学位论文神经生长因子和银杏达莫预处理对乳鼠离体脑片谷氨酸和过氧化氢不同损伤保护作用的比较研究研究生：陈广福导师：王迪芬刘怀清卢建明年级：2010级专业：麻醉学2013年5月1日贵阳医学院2013届硕士研究生论文目录摘要„„„„„„„„„„„„„„02前言„„„„„„„„„„„„„„04材料与方法„„„„„„„„„„„„05结果„„„„„„„„„„„„„„11讨论„„„„„„„„„„„„„„27参考文献„

2、„„„„„„„„„„„„33英文摘要„„„„„„„„„„„„„35致谢„„„„„„„„„„„„„„38略缩词表„„„„„„„„„„„„„39论文原创性声明„„„„„„„„„„40附：综述„„„„„„„„„„„„411贵阳医学院2013届硕士研究生论文神经生长因子和银杏达莫预处理对乳鼠离体脑片过氧化氢和谷氨酸不同损伤保护作用的比较研究专业：麻醉学（重症医学）姓名：陈广福导师：王迪芬刘怀清卢建明摘要【目的】：摸索和熟练掌握乳鼠离体脑片的培养技术；建立离体脑片谷氨酸(Glu)和过氧化氢(H202)的损伤模型；探讨神经生长因子（NGF）和银杏达莫预处理

3、对乳鼠离体脑片Glu和H202损伤的保护作用及这种保护作用是否有差异性。【方法】：取7天新生乳鼠皮层切成400μm厚度脑片置于有微孔膜的插入式培养皿内同时放入37℃,5%CO2、95%空气的标准培养箱内保持脑片在气液界面上进行培养。脑片培养成功后随机分为七组：A组（正常对照组），B组（Glu损伤组），C组（H202损伤组），D组(NGF预处理Glu损伤组)、E组(NGF预处理H202损伤组)、F组(银杏达莫预处理Glu损伤组)、G组(银杏达莫预处理H202损伤组)共7组（每组12个样本）。NGF预处理组以最佳浓度50ug/L进行预处理。银杏达莫

4、预处理组以最佳浓度40mg/L进行预处理。D组和E组以50ug/LNGF预处理24h后分别以1mmol/LGlu和0.1mmol/LH202损伤30分钟，F组和G组以40mg/L银杏达莫预处理组24h后分别以1mmol/LGlu和0.1mmol/LH202损伤30分钟，将所有分组换正常培养基继续培养72h后观察。观察指标为：显微镜下脑片形态学观察；HE染色后脑片组织内细胞形态变化及透射电镜下细胞超微结构的变化；2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC)染色比色法测定各组脑片组织损伤率变化；检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率；使用免疫组织化学法检测神经细

5、胞标记物热休克蛋白70（HSP70）阳性表达的变化。【结果】：1.显微镜下培养脑片逐渐变薄向外迁移倾向、细胞形态完整、存活良好；A组HE染色脑片层次清楚，神经元数量多、密度大，胞核大而圆呈蓝色，胞浆染色浅呈淡红色，部分见明显核仁，神经元周围有较多圆形或椭圆形胶质细胞。B、C组HE染色脑片结构无A组丰富，神经元数量及密度明显减少，细胞空泡状，胞核固缩，部分细胞可见卷曲，皱缩变形，胶质细胞增多。D、E、F和G组脑片细胞数量减少不明显，可见少量细胞胞浆呈深红色，核固缩不明显。2.透射电镜下观察：A组见神经元细胞核仁明显，核染色质均匀，核膜呈2贵阳医学

6、院2013届硕士研究生论文两暗一明；细胞浆内各种细胞器丰富，可见大量散在核糖体、线粒体、粗面内质网结构完好。B、C组核膜破裂，核染色质边集，线粒体可见肿胀空化，粗面内质网溶解或消失。D、E、F和G组核膜、胞膜正常，胞浆内细胞器数量减少但不如A组丰富，核膜融合、裂隙变宽，细胞浆稀疏溶解现象，有的粗面内质网扩张见局灶溶解。3.乳酸脱氢酶（LDH）漏出率及脑片TTC染色组织损伤率结果：D、E、F和G组与B、C组比较，差异均有统计学意义（P均＜0.05）；4.A组HSP70神经细胞阳性表达不明显；B、C组HSP70神经细胞阳性表达明显；D、E、F和G组

7、HSP70神经细胞阳性介于A组和B、C组两者之间。【结论】：成功建立离体脑片损伤模型；NGF和银杏达莫预处理组对离体乳鼠脑片Glu和H202的损伤均有保护作用；NGF和银杏达莫的神经细胞保护作用二者比较（P均>0.05）无统计学差异。【关键词】过氧化氢热休克谷氨酸蛋白70脑片前言脑血管疾病是导致我国中老年死亡的重要原因，其中以缺血性脑血管病(ICVD)的发病率为最高。ICVD是一种常见急症，发病机制复杂、致死率和致残率高，对人类生命健康造成威胁。随着现代医学发展对ICVD的病理生理过程及新治疗方法的深入研究，更有效预防减轻脑损伤。脑血管病造成神

8、经细胞损伤无有效的治疗方法，神经功能缺损无法恢复，给社会和家庭带来沉重负担。目前缺血损伤机制及缺血性损伤的“瀑布效应”，在脑缺血不同时间窗口期应用神经