丙泊酚预处理对乳鼠脑片谷氨酸损伤保护作用的研究

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1、贵阳医学院2012届硕士研究生论文《中国图书资料分类法》单位代码：10660分类号：R743.31学号：S090471贵阳医学院2012届硕士学位论文丙泊酚预处理对乳鼠脑片谷氨酸损伤保护作用的研究研究生：周晓峰导师：王迪芬年级：2009级专业：麻醉学2012年5月20日贵阳医学院2012届硕士研究生论文目录摘要„„„„„„„„„„„„„„02前言„„„„„„„„„„„„„„04材料与方法„„„„„„„„„„„„07结果„„„„„„„„„„„„„„12讨论„„„„„„„„„„„„„„18参考文献„„„„„„„„„„„„„23英文摘要„„„„„„„„„„„„„26致谢„„

2、„„„„„„„„„„„„28略缩词表„„„„„„„„„„„„„29论文原创性声明„„„„„„„„„„30附：综述„„„„„„„„„„„„311贵阳医学院2012届硕士研究生论文丙泊酚预处理对乳鼠脑片谷氨酸损伤保护作用的研究专业：麻醉学（重症医学）姓名：周晓峰导师：王迪芬【摘要】目的：探索并熟练掌握离体脑片培养技术；建立离体脑片的谷氨酸损伤模型；探讨丙泊酚预处理对乳鼠脑片谷氨酸损伤的保护作用。方法：取新生10-15天乳鼠皮层切成400UM厚度的脑片置于有微孔膜的培养皿内同时放入37℃,5%CO2、95%O2的标准培养箱保持脑片在气液界面上进行培养。脑片培养成功至第七天随

3、机分为四组：A组（正常对照组），B组（谷氨酸损伤组），C组（10mg/l丙泊酚预处理组），D组（20mg/l丙泊酚预处理组）。C组和D组分别予以10mg/l、20mg/l丙泊酚预处理24h后B、C、D组予以1mmol/L谷氨酸损伤0.5h，所有分组换正常培养基继续培养24h后观察。观察指标为：脑片形态学观察；HE染色后脑片组织内细胞形态变化和透射电镜下细胞超微结构变化；TTC（2,3,5—氯化三苯基四氮唑)染色比色法测定各组脑片组织损伤率；乳酸脱氢酶（LDH）检测漏出率；使用免疫组织化学法检测星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的变化。结果：1.显微镜下

4、培养脑片逐渐变薄、细胞形态完整、存活良好；HE染色A组脑片层次清楚，各层神经元数量多、密度大，胞内核大而圆呈蓝色，胞浆染色浅呈淡红色，部分可见明显核仁，神经元周围有许多圆形或椭圆形胶质细胞。B组脑片结构无A组丰富，神经元数量及密度明显减少，细胞空泡状，胞核固缩，部分细胞卷曲、皱缩变形，胶质细胞明显增多。C和D组细胞数量减少不明显，可见少量细胞胞浆呈深红色，核固缩。2.透射电镜下A组见神经元细胞核仁明显，核染色质均匀，核膜呈两暗一明、均质正常；细胞浆内各种细胞器丰富、正常，见大量散在核糖体，胞浆线粒体、粗面内质网结构完好。B组核染色质边集、核膜破裂，线粒体肿胀空化、嵴消

5、失，粗面内质网溶解、消失。C和D组胞膜、核膜正常，胞浆内细胞器数量明显减少不如正常组丰富，核膜融合、裂隙增宽，细胞浆稀疏出现溶解现象，部分粗面内质网扩张见局灶溶解。3.乳酸脱氢酶（LDH）漏出率及皮层脑片TTC染色组织损伤率结果显示：C、D组与B组比较，差异有统计学意义；D组较C组培养液中LDH释放量及LDH释放率减少，二者间差异有统计学意义，D组较C组皮层脑片TTC染色吸光度值（A490）2贵阳医学院2012届硕士研究生论文高,组织损伤率低,二者间差异有统计学意义。4.A组星形胶质细胞均匀分布，细胞核较小、呈圆形或卵圆形，细胞突起细长,GFAP阳性的星形胶质细胞表达

6、少；B组星形胶质细胞胞体肥大、肿胀、突起增多,GFAP阳性的星形胶质细胞表达增加，阳性反应强；C、D组与B组相比GFAP阳性胶质细胞数量减少,阳性反应减弱,细胞形态有所恢复。结论：离体脑片培养成功，随着培养时间的延长脑片厚度变薄，镜下结构清晰；成功建立脑片谷氨酸损伤模型；丙泊酚预处理对乳鼠脑片的谷氨酸损伤有保护作用。【关键词】丙泊酚谷氨酸脑片3贵阳医学院2012届硕士研究生论文前言目前临床上常见的脑外科手术如：脑膜瘤切除术、颈静脉剥脱术、颅内动脉瘤夹闭术等术中行控制性降压、血管夹闭再通等均可引起脑组织的再灌注损伤，导致病人的神经功能障碍.因此,探讨脑缺血再灌注损伤的发

7、病机制及药物的保护作用就显得十分必要。缺血一定时间恢复血液供应后，其功能不但未能恢复，却出现了更加严重的脑机能障碍，称之为脑缺血再灌注损伤（cerebralischemiareperfusioninjury,CIR）。脑缺血再灌注损伤与自由基的生成、细胞内钙超载、兴奋性氨基酸毒性、白细胞高度聚集和高能磷酸化合物的缺乏等有关。它是一个复杂的病理过程，包括缺血期的原发性损伤和再灌注期的继发性损伤。急性脑缺血引起的缺血中心区死亡以细胞坏死为主，即脑缺血后5-7分钟内，细胞能量耗竭，K+通道受阻，膜电位降低，神经末梢释放谷氨酸，通过兴奋谷氨酸受体（包括NMD