依达拉奉和神经节苷脂预处理对乳鼠离体脑片不同性质损伤神经保护作用的比较研究

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1、贵阳医学院2013届硕士研究生论文《中国图书资料分类法》分类号：R743.31单位代码：10660学号：S100362贵阳医学院2013届硕士学位论文依达拉奉和神经节苷脂预处理对乳鼠离体脑片不同性质损伤神经保护作用的比较研究研究生：张虎导师：王迪芬年级：2010级专业：麻醉学2013年3月10日1贵阳医学院2013届硕士研究生论文目录中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3结果„„„„„„„„„„„„„„„„

2、„„„„„9讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„19结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„21参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„21英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„23致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„25略缩词表„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„26论文原创性声明„„„„„„„„„„„„„„„„„27附：综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„282贵阳医学院2013届硕士研究生论文依达拉奉和神经节苷脂预处理对乳鼠离体脑片不同性质损伤神经保护作

3、用的比较研究专业：麻醉学研究生：张虎导师：王迪芬摘要目的：比较依达拉奉（EDA）和神经节苷脂（GM1）预处理对谷氨酸及过氧化氢不同性质损伤后大鼠皮层脑片的神经保护作用。方法：采用新生7日龄SD大鼠，取出大脑后采用切片机将皮层部分切为脑片进行离体脑片培养，因不同性质损伤采用谷氨酸损伤模型和过氧化氢损伤模型两种模型，两种损伤模型又分别分为对照组、损伤组、100μmol/LEDA预处理组及1μmol/LGM1预处理组，由于对照组相同，所以共分7组，每组12例。对照组脑片培养第四天用正常培养基替代损伤培养基孵育30min；

4、损伤组（分2组）脑片于培养第四天给予含1mmol/L谷氨酸或0.1mmol/L过氧化氢的培养基孵育30min；药物保护预处理组（分4组）脑片于培养第三天转至含有100μmol/LEDA或1μmol/LGM1的培养基中孵育24h，第四天同损伤组。谷氨酸或过氧化氢损伤后24h测定脑片2,3,5－三苯基四氮唑(TTC)染色的A490值并计算组织损伤率，用乳酸脱氢酶（LDH）释放率分析脑片活性，用荧光染料PropidiumIodide(PI)观察细胞损伤程度；损伤后72h脑片用尼氏体染色检测神经元数量，用苏木素-伊红(HE

5、)染色后在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化，用透射电镜观察细胞超微结构改变，用免疫组织化学方法检测Caspase-9阳性表达细胞的数量。结果：1.谷氨酸损伤模型两种药物预处理保护组与损伤组相比：药物预处理组皮层脑片TTC染色A490值均升高，组织损伤率均减小，LDH释放率均减小，PI荧光显示红色损伤细胞数均减少，神经元密度均增高，细胞形态受损程度和神经元超微结构病变均减轻，caspase-9表达阳性细胞均减少；2.谷氨酸损伤模型两种药物预处理保护组之间比较：均无发现明显差异；3.过氧化氢损伤模型两种药物预处理保护组

6、与损伤组相比：药物预处理组皮层脑片TTC染色A490值均升高，组织损伤率均减小，LDH释放率均减小，PI荧光显示红色损伤细胞数均减少，神经元密度均增高，细胞形态受损程度和神经元超微结构病变均减轻，caspase-93贵阳医学院2013届硕士研究生论文表达阳性细胞均减少；4.过氧化氢损伤模型两种药物预处理保护组之间比较：均无发现明显差异。结论：两种药物EDA或GM1预处理可使谷氨酸或过氧化氢损伤后的新生大鼠皮层脑片的神经元细胞损伤程度减轻，凋亡细胞的数量减少。但两种药物在该实验采用的剂量下，其预处理效应无统计学差异。

7、关键词：依达拉奉神经节苷脂谷氨酸过氧化氢脑片神经保护4贵阳医学院2013届硕士研究生论文一前言大脑是机体能量需求最旺盛的器官，但几乎没有氧和能量储备，其能量全部来自血液循环的供应，其重量虽只占体重的2%，可耗氧量却占全身耗氧量的20%-25%。预处理是近20多年发现能减轻脑缺血/再灌注损伤（IRI）的途径之一，因药物预处理具有相对安全、使用方便、易控等优点，成为研究脑保护的一种新[1]途径和发展趋势。脑IRI的发病机制尚不明确，多数学者认为兴奋性氨基酸类神经递质异常和氧自由基对神经元的损伤是其中两个重要发病机制，故

8、本次课题试验采用谷氨酸损伤及过氧化氢损伤来模拟这两种重要发病机制。依达拉奉（EDA）是一种较强的自由基清除剂，具有清除自由基、抗氧化、抗细胞凋亡及[2]神经保护作用。神经节苷脂（GM1）已被证实可以促进神经生长和营养神经的[3]作用外，近年来的研究表明GM1能保护细胞膜，恢复细胞膜上酶的活性，减少兴奋性氨基酸的神经毒性作用，可以保护脑缺血，减轻脑水肿，减少其