表达大肠杆菌ltak63与ltb蛋白重组干酪乳杆菌系统的构建及其黏膜佐剂活性的评价

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1、ClassifiedIndex：Confidential(yes／no)：110Code：10224N0．1006425DissertationfortheMasterDegreeConstructionofRecombinantLactobacillusCaseiExpressionLTAK63andLTBofE．coliandMucosalAdjuvanticityEvaluationCandidate：Supervisor：DegreeCategory：College：Firstleveldiscipline：Secondleveldiscipli

2、ne：HarbinJuneChenChaoyangProf．LiYijingMasterofAgricultureVeterinaryMedicineVeterinaryMedicinePreventiveVeterinaryMedicineChina2013目录／㈣2．2．6重组干酪乳杆菌灌胃免疫小鼠FaeG抗体的监测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯252．2．7重组干酪乳杆菌灌胃免疫小鼠攻毒保护性试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。263．I．2重组质粒pMDl8-Ts．LTA、pMDl8-Ts．LTB和pMDl8·Ts-rsLTB的鉴定结果⋯。28东北

3、农业大学农学硕士学位论文3．1．3用PCR重叠延伸法突变LTA基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。293．1．4重组质粒pMDl8-Ts-LTAK63、pMDl8-Ts-LTAK63t的鉴定结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．293．2LTB单克隆抗体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯303．2．1抗原制备及其GMI结合活性检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯303．2．2杂交瘤细胞的检测与细胞株的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l3．2．3单克隆抗体的特异性检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3l3．2

4、．4杂交瘤细胞分泌抗体稳定性的分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．323．2．5杂交瘤细胞株染色体分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯333．3LTA基因在大肠杆菌中的诱导表达和免疫原性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。333．3．1原核表达载体pET-28a-LTA的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯333．3．2LTA基因在大肠杆菌中表达产物的SDS．PAGE鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯343．3．3重组蛋白LTA表达鉴定及纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。353．3．4间接ELISA检测重组LTA抗血清效价⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。353．3．5重组蛋白LTA抗原性的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。353．4重组干酪乳杆菌表达系统的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯363．4．1重组干酪乳杆菌表达载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯363．4．2表达L1lAK63t-rsLTB、LTAK63．LTB重组干酪乳杆菌的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯383．5重组干酪乳杆菌的诱导及表达蛋白的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯393．5．1表达产物的SDS．PAGE鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3

6、93．5．2表达产物的WesternBlot鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。393．6重组干酪乳杆菌对FaeG诱导特异性免疫应答的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．403．6．1免疫小鼠血清中抗FaeG特异性抗体IgG测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．403．6．2免疫小鼠外生殖道冲洗液抗FaeG特异性slgA检测结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯413．6．3免疫小鼠鼻腔冲洗液抗FaeG特异性sIgA检测结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯423．6．4免疫小鼠粪便中抗FacG特异性sIgA检测结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．433．6．5免疫小鼠脾淋巴

7、细胞增殖试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．“3．7重组干酪乳杆菌灌胃免疫小鼠保护性试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．“3．7．1K88：*ETEC对小鼠最小致死量的测定结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。443．7．2免疫小鼠的攻毒保护性试验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯454讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯464．1课题的研究思路⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯464．2LTB单克隆抗体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．464．3L1’AK63与LTB基因在重组干酪乳杆菌中的表达⋯⋯