幽门螺杆菌KatA及KatA与大肠杆菌LTB融合蛋白的表达研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文幽门螺杆菌KatA及KatA与大肠杆菌LTB融合蛋白的表达研究姓名：陶惠申请学位级别：硕士专业：病原生物学指导教师：朱道银;邹全明2003.5.1重庆医科大学硕士学位论文缩写AmpbpBSAcTC1’ABDABddH20DNAdNTPDTTEBEcoliEDTA叫SAEpGMl印HRP坤TGK姐KatA如LB英文缩写一览表英文全称ampidllinbasepairbovinesenlmalbumincholerat00dnc螂ltrimethylammoniumbromidediaminobenzidineDeionic

2、distilledw'at,grdeoxyribonucleicaciddeoxyribonucleosidetriphosphatedilhiothrdtolethidiumbromideEscherichiacoliethylenediaminetetmaceficacidenzyme-linkedimmunosorbentassayeppendorfgangliosideGMlHelicobacterpylorihorseradishperoxidaseisopropyl-1thio-B-D-galactosidekanmnycincat

3、aIRsekiloda]tonLuria-Bertaninbroth中文全称氨苄青霉素碱基对牛血清自蛋白霍乱毒素十六烷基三甲基溴化铵二氨基联苯胺去离子水脱氧核糖核酸脱氧核苷三磷酸二硫苏糖醇溴化乙锭大肠杆菌乙二胺四乙酸酶联免疫吸附测定微量离心管神经节苷脂GMl幽门螺杆菌辣根过氧化物酶异丙基学i．傅B-D半乳糖苷卡那霉素过氧化氢酶千道尔顿LB培养基重庆医科大学硕士学位论文LTheat-labileentcrotoxin不耐热肠毒素LTBheat-labileenterotoxinBsubunit不耐热肠毒素B亚单位rainminute分钟mlmil

4、liliter毫升ODopticaldensity吸光度OPDo-phenylenediamine邻苯二胺PAGEpolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PBSphosphateb墒eredsaIi∞磷酸盐缓冲液PCRpolymemsechainreaction聚合酶链式反应r／minrevolutionsperminute转，分PVDFpolyvinyfidenedifluoride聚偏二氟乙烯RpmRotationsperminute每分钟转速SDSsodiumdodccylsulfate十二烷基硫

5、酸钠TAETris／acetate／(buffer)Tris／Z,酸电泳缓冲液TETris／EDTAbufferTris-EDTA缓冲液’TEMEDN,N,N’N’-tetramethylethylenedisi血eNN’N’，N’一四甲基乙二胺Tris2-Amino-2-hydroxymethyl-1．3·propanediol三羟甲基氨基甲烷UUnit单位lllmicroliter微升x-gal5-bromo-4-chlom-3-indolyl-B-D-galactosidc5-溴一4一氯一3一吲哚．B-D．半乳糖昔重庆医科大学硕士学位论文

6、幽门螺杆菌Ka埝及KatA与大肠杆菌LTB融合蛋白的表达研究摘要幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,rip)的高感染率及其严重的危害性，使烯，疫苗成为医学微生物领域研究的热点之一，为探讨过氧化氢酶(Catalase，＆I认)作为基因工程疫苗候选抗原在防治坳感染中的作用，本研究采用PCR方法从埤刈岛床分离株中克隆katA基因(katA)，构建Hp过氧化氢酶高效表达载体，并对重组工程菌的表达条件进行优化；重组蛋白KatA(rKatA)经镍离子亲和层析纯化后，以Westernblot、ELISA及动物实验检测其免疫学活性。在此基础上，进

7、一步采用重叠延伸技术将大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位佤coliheat．1abileenterotoxinBsubunit,LTB)基因qts)和勋蹦基因以不同次序进行融合并分别在大肠杆菌中进行表达，筛选较理想的KatA．LTB融合蛋白表达载体，以期获得既具有免疫学活性又具有粘膜佐剂活性的KatA．LTB融合蛋白，为进一，步研制均，分子内佐剂亚单位疫苗奠定基础。／全文结果与结论如下：L1．采用PCR技术分别从我国临床分离的np菌株及国际标准菌株NCTCll637中克隆了npkatA基因，序列全长1518bp，推定其编码氨基酸505个，与NCTCl

8、l637及GenBartk公布的四株np的妇d基因重庆医科大学硕士学位论文及氨基酸序列比较，碱基一致率大于95％，氨基酸相同率在97％以上。2．构建了