蒙药漏芦花抗甲型流感病毒药效物质基础及作用机理研究

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1、分类号——ICS——学校代码学号10136201000168薹，蔓‘～委～耳鲞家名民庆大学硕士学位论文蒙药漏芦花抗甲型流感病毒药效物质基础及作用机理研究TheResearchforMaterialBaseandMechanismofActionofMongolianMedicineLouluFlowerAgainstH1N1申请人：娜荷芽学科专业：中药学研究方向：蒙药配伍规律工艺及新药研究学位类别：学术学位指导教师：图雅教授论文提交B期：二O一三年四月摘要目的：筛选蒙药漏芦花抗甲型流感H1N1病毒活性成分及作用机理研究。方法：①运用S

2、PR-BIAeore技术，筛选蒙药漏芦花抗甲型流感有效部位。②利用酶联免疫实验(ELISA)测试技术对筛选到的漏芦花有效部位进行细胞水平药效学研究。⑤Macsynergy软件与酶联免疫ELISA法结合检测漏芦花与已上市的达菲的联合应用的协同作用。④运用传统硅胶、凝胶等柱层析法对漏芦花有效部位进一步分离提取抗HINI病毒的活性成分。⑤利用神经氨酸酶和SPR．BIAcore技术对漏芦花的作用机理进行研究。结果：利用SPR．BIAcore技术筛选到漏芦花的乙酸乙酯部位对甲型流感病毒具有很好的抑制率，结果显示：漏芦花乙酸乙酯提取物与HINl的

3、膜蛋白(HA)、结合值500pg／mL时700．7RU、核蛋白NP结合值为100pg／mLt'寸161RU，利用体夕t'ELISA实验结果表明漏芦花乙酸乙酯部位对甲型流感HINl病毒有很好的活性，其IC50可以达至J]330．09pM．漏芦花乙酸乙酯部位的抑制率为：64．59％。利用Maesynergy软件实验结果发现，漏芦花与已上市的达菲具有高度协同作用，协同值为125．21nM2％。用传统的硅胶、凝胶等柱层析法对漏芦花乙酸乙酯部位提取分离得N5个单体，并得到具有抗HINl有效的活性单体LLH．2，单体抗H1N1病毒抑制率为70．5

4、9％。神经氨酸酶实验结果发现漏芦花具有抑制神经氨酸酶的作用，抑制率为50．48％、达菲抑制率51．41％。结论：漏芦花乙酸乙酯具有抗甲型流感病毒HlNl活性，漏芦花乙酸乙酯部位分离得到的单体LLH．2对甲型流感病毒有效，神经氨酸酶实验和BIAcore实验表明漏芦花的作用靶点可能是H1N1病毒的HA、NA蛋白。关键词：蒙药；漏芦花：甲流感病毒：SPR．BIAcore；ELISATheResearchforMaterialBaseandMechanismofActionofMongolianMedicineLouluFlowerAgain

5、stH1N1Abstractobjective：TostudytheeffectivecomponentsandmechanismofactionofmongolianmedicineLouluFloweragainstHINl．Method：1)ToapplySPR-BIAcoretoscreeneffectiveextractsofMongolianmedicineLoulufloweragainstH1NI．2)ToapplyELISAtOstudytheeffectivecomponentofLoulufloweronacel

6、lularlevel．3)TostudythesynergisticactionbetweenLouluflowerandDaphiethroughcombinngELISAandMacsynergy．4)ToapplyColumnchromatographytoseparatetheactivegradients．5)TostudytheactionofmechanismofLouluflowerbynuraminidaseexperimentandSPR-BIAeore．Results：1)TheresultsofSPR—BIAc

7、oreshowedthattheextractoftheethylacetateofLoulufloweractivedhighly．ItsvalueofbindingHAreached700．7RUwhentheconcentrationwas500ug／mLandbindingNPreached161RUwhentheconcentrationWas100ug／mL．2、TheresultsofELISAindicatedthattheextractoftheethylacetateactivedsignificantlyandi

8、tsIC50Was330．09UMandinhibitingrateoftheextractswas64．59％．3)MacsynergyshowedthatLouluflowerandDaphiehadahighdeg