白灵侧耳结实相关基因的克隆及表达分析

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1、分类号：密级：$646坌匠单位代码：至QQ鳗学号：2Q!Q墨2旦白灵侧耳结实相关基因的克隆及表达分析CloningandAnalysisoftheGeneFragmentsRelatedtoFructificationofPleurotuseryngiivar．moliensis学位申请人：陈苗苗指导教师：李明教授张金霞研究员学科专业：蔬菜学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二。一三年六月二日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中

2、特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑些盔些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：阱为自签字日期：列弓年石月上日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑皇垦壅些盘堂有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权塑兰垦盎些盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采

3、用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：两均囱⋯名加(／签字日期：201弓年6月≯日签字日期：砂膨年∥月砂目学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：摘要白灵侧耳(PleurotuseryngiiVOX．moliensisC．J．Mou)营养丰富、药用价值高，深受人们喜爱，但由于生长周期长、菇蕾发育同步性差、畸形菇严重，致使栽培经济效益较低，严重影响了其产业发展。因此培育原基发生早、原基发生整齐的新品种已成当务之急。在传统育种的基础

4、上结合并发挥分子育种的优势加快育种进度成为必然。阐明白灵侧耳结实的分子机理是开展分子辅助育种首要解决的问题，而结实分子机理研究的第一步就是寻找与其结实相关的关键基因。本研究以白灵侧耳菌丝和原基为材料，利用LiCl沉淀法对两阶段的RNA进行提取并纯化，然后利用3条锚定引物和26条随机引物组成的78个引物组合对两个发育阶段cDNA进行差异显示PCR扩增，并用非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对两发育阶段的差异片段进行筛选，对获得的差异片段进行切胶回收并纯化，将纯化片段克隆测序后重新设计引物，并以beta—ac

5、tin基因为内参基因，采用半定量PCR的方法验证差异片段的真实性，最后应用生物信息学方法对真实的差异片段进行同源性分析并对基因功能进行预测。引物筛选结果表明，78个引物组合中，锚定引物H．TIlA组成的引物对扩增出的差异条带最多，效果最好，其余两个效果较差。结实相关基因片段克隆及序列分析结果显示，在菌丝和原基两个发育阶段中最终共获得8条差异片段，差异条带大小多在200．500bp之间。l条与未知蛋白具有40％氨基酸同源性的基因片段在菌丝中高表达，其余7条在原基中高表达，7条片段经同源性分析得知分别与细胞色素P

6、450、糖基转移酶、扩展蛋白、糖苷水解酶家族3、核糖体蛋白L29、高半胱氨酸甲基转移酶、未知蛋白的氨基酸同源性为63％、32％、88％、38％、83％、45％、34％。这些差异片段涉及能量代谢、糖代谢、细胞壁修复与重建、活性氧及蛋白质合成等细胞代谢途径。差异基因的获得为食用菌结实机理的研究及食用菌育种奠定了基础。关键词：白灵侧耳；菌丝：原基；结实；mRNA差异显示技术ScreeningandAnalysisoftheGeneFragmentsRelatedtoFructificationofPleurotus

7、eryngiivat．tuoliensisAuthor：．ChertMiaomiaoMajor：OlerieultureAdvisor：．LiMingProfessor,ZhangJinxiaResearcher(CollegeofHorticulture，AgriculturalUniversityofHebei，Baoding，071001，China)AbstractsPleurotuseryngiivat．tuoliensisispopularwithconsumersforitsnutritiona

8、landmedicinalvalues．However,theadverseagronomiccharacterssuchasthelonggrowthperiod，thepoordevelopingsynchrotronofprimordium，andthemalformationoffruitbodynotonlyleadtothereductioninitseconomicbenefitofc