绿脓杆菌鞭毛蛋白flge的重组表达及初步活性鉴定

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1、分类号：R772．2密级：公开单位代码：10427学号：2010010398洚却幺雩硕士学位论文绿脓杆菌鞭毛蛋白FIgE的重组表达及初步活性鉴定研究生姓名林丹丹导师姓名学科、专业所在学院申请学位级别王宜强教授眼科学曼二ZJ学与生命科学学院山东省医学科学院。’一一一⋯一医学硕士答辩时间2013年5月ExpressionandcharacterizationofrecombinantflagellinFIgEofPseudomonasByLinDanDanUndertheSupervisionofProf．WangYiQiangAThesisSubmittedtotheUniversit

2、yofJinanInPartialFulfillmentoftheRequirementsFortheMasterDegreeofMedicineUniversityofJinanJinan，Shandong，ER．ChinaMay，2013姓名王宜强性别男研究生导师介绍技术职务和职称从事专业教授眼科学基础导师简介：王宜强男，1966年5月出生，博士，研究员，“泰山学者”特聘教授‘(眼科学)，博士生导师。中华医学会眼科学分会免疫学组委员。自大学开始从事基础医学领域的学习和研究，1999年lO月至2004年2月先后在美国爱荷华大学(UniversityofIowa)医学院从事博士后及助

3、理研究科学家(AssistantResearchScientist)工作，现主要研究方向为眼科生理和疾病相关的免疫学理论与应用基础。自2004年回国受聘于山东省眼科研究所以来，主持国家自然科学基金课题四项、973前期研究专项一项、山东省自然科学杰出青年基金一项：参与其他项目多项。发表研究论文共计七十余篇，其中以第一或者通讯作者发表SCI论文27篇。原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。

4、本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：日期：卫!圣：鱼：堕关于学位论文使用授权的声明本人完全了解济南大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借鉴；本人授权济南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。。酸开口保密(年，解密后应遵守此规定)论文作者签名：盟导师签名：堑日期：——济南大学硕士学位论文目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．IIAbstract⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．ItI主要符号表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．V引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1第一章材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．31．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31．2方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8第二章结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．1FlgE基因的扩增以及表达质粒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．2重组Fl班的表达及

6、纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．172．3重组FIgE促进HCEC分泌炎性因子⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19第三章讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一22综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一．．．．．：⋯⋯⋯．24综述参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一30攻读学位期间的研究成果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一35致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．36绿脓杆菌鞭毛蛋白

7、FIgE的重组表达及初步活性鉴定专业眼科学研究生林丹丹导师王宜强教授摘要目的：原核表达及纯化绿脓杆菌鞭毛蛋白FIgE并进行初步活性鉴定。方法：分析绿脓杆菌鞭毛蛋白FIgE的基因序列，设计带适当酶切位点的引物，用PCR方法扩增出FlgE的编码DNA序列，与大肠杆菌表达载体pET24a同时经NdeI／HindlII双酶切、纯化及连接后构建pET24a—FIgE原核表达质粒，挑选重组阳性质粒经DNA测序确认序列正确，转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达条件优化，