幽门螺杆菌外膜36kda 蛋白重组表达与初步鉴定

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1、幽门螺杆菌外膜36kDa蛋白重组表达与初步鉴定幽门螺杆菌外膜36kDa蛋白重组表达、纯化及初步鉴定鞠小丽，邵世和，郝渭滨，董苏荣，崔蕾蕾摘要：［目的］构建幽门螺杆菌（H.pylori）NCTC11637菌株36kDa（OMP36）外膜蛋白基因原核表达系统，探索研制H.pylori疫苗的新途径。［方法］培养和收集H.pyloriNCTC11637菌株，提取基因组DNA，PCR扩增目的基因片断。将其克隆到T载体并测序，再将目的基因克隆入PET32a（+），构建重组表达载体PET32a-OMP36。转化E.coliBL21后IPTG诱导表达，经S

2、DS-PAGE鉴定、镍亲和层析纯化、Westernblot检测表达蛋白。［结果］测序分析表明，插入的基因片断为987bp，表达的蛋白的相对分子质量（Mr）约为36kDa，并显示具有良好的抗原性。SDS-PAGE检测表明，表达量占细菌总蛋白的37%，镍亲和层析纯化率约92%。Westernblot检测表达蛋白具有良好的抗原活性。［结论］成功克隆了外膜蛋白OMP36kDa的编码基因，其表达产物OMP36有望成为新的Hp疫苗候选分子，为H.pylori疫苗的研制和试剂盒的开发奠定了良好的基础。关键词：幽门螺杆菌；外膜蛋白；基因表达；蛋白纯化EXP

3、RESSION，PURIFICATIONANDPRELIMINARYIDENTIFICATIONOF36KDAOUTERMEMBRANEPROTEINFROMHELICOBACTERPYLORIJUXiao-li，SHAOShi-he，HAOWeibin，etal.（DepartmentofMicrobiology，SchoolofMedicalTechnology，JiangsuUniversity，Zhenjiang212003，China）Abstract：［Objective］Toestablishtheexpressionsyst

4、emof36kDaoutermembraneproteinfromstrainNCTC11637ofH.pylori，andtoexplorethenewroutefordevelopvaccineofH.pylori.［Methods］TheNCTC11637strainofH.pyloriwereculturedandcollected，whoseDNAwasextracted，andthegenesegmentswereamplifiedbyPCR.ThegenesegmentswereclonedtoTcarrierandseque

5、nced，thentheobjectivegenewereclonedintoPET32a（+），followedbyconstructingrecombinationofexpressionvector-PET32a-OMP36.AfterinducedwithIPTG，theexpressionofOMP36proteinwasidentifedbySDSPAGE，purifiedwithnickelaffinitychromatograph，anddetectedbyWesternblot.［Results］Thesequencing

6、analysisdemonstratedtheinsertedgenesegmentwas978bp，andrelativemoleculemass（Mr）ofexpressedproductwas56KDa，whichshowedgoodantigenicity.ThedetectionofSDS-PAGEshowedthesolubleexpressionproductaccountedfor37%oftotalbacterialproteinandthethepurityofrecombinantfusionproteinwasabo

7、ut92%.Westernblotanalysisshowedthatrecombinantfusionproteinhadgoodantigenicity.［Conclusion］ThegenecodingforOMP36wasclonedsuccessfully，anditsexpressionproduct，OMP36，mayserveasacandidatevaccineforH.pylori.ThiscouldsettlegoodbasicfordevelopingthevaccineofH.pyloriandkit.Keywor

8、ds：Helicobacterpylori；OMP；Geneexpression；Proteinpurification幽门螺杆菌（H.pyloriHp）是人类重要致病菌，其感染