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《α2羟基酸在不同的手性配体交换色谱固定相上分离性能的考察》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第31卷分析化学(FENXIHUAXUE) 研究报告第6期2003年6月ChineseJournalofAnalyticalChemistry650～654α2羟基酸在不同的手性配体交换色谱固定相上分离性能的考察3祝馨怡 陈立仁 柳春辉 李永民(中国科学院兰州化学物理研究所,兰州730000)摘 要 合成了L2羟基脯氨酸,L2脯氨酸,L2苯丙氨酸3种硅胶键合手性配体交换色谱固定相,并用于α2羟基酸的直接光学分离,取得了较为满意的结果。对不同的手性配体交换色谱固定相的分离性能进行了比较,并详细考察了流动相pH值、金属离子浓度、柱温等因素对分离效果的影响,从而进一步优化了色谱分离条件。关键词 α2
2、羟基酸,手性固定相,对映体分离,配体交换色谱1 引 言α2羟基酸是α2氨基酸的天然类似物,它参与生物体的许多重要的生理活动,在医药工业中也有着广1泛的应用。但是它的生理活性却与其绝对构型严格对应。因此,拆分α2羟基酸以得到其单一的对映体构型以及测定其对映体纯度,近年来引起了人们的广泛关注。目前采用的物理法、化学法以及酶法等光学法拆分的缺陷是效率低,需多次重复操作制备,且所用的手性试剂及酶制剂一般难以得到,不便回2收及反复使用。采用通常的气相色谱和液相色谱法拆分,一般需要柱前样品衍生化。衍生化过程不3仅费时麻烦,而且有可能使分析物质发生消旋,影响分析结果。到目前为止,手性配体交换色谱法是直接分
3、离α2羟基酸的最简便有效且应用最为广泛的一种分离手段,它与传统的方法相比具有选择性高、无需进行柱前衍生化、流动相多采用水及对环境无污染等优势。配体交换色谱技术是1961年由Helfferich首次提出的,并通过Rogozhin和Davankov等人的进一步发4展,使其成为一种有效的手性色谱分离法。手性配体交换色谱的分离机制是配位交换,分离过程如下式所示:CLnM+L2CSCLn-1ML2CS+CL(n≥2)(1)CLnM+D2CSCLn-1MD2CS+CL(n≥2)(2)在配体交换色谱中,手性配体(CL)与金属离子(M)形成络合物(CLnM)并与对映体(CS)发生交换作用,对映体D2和L2型与
4、手性配体固定相所形成的络合物稳定性不同,K1≠K2,决定了它们在洗脱液作用下的保留时间或保留体积也不同,越稳定者,其保留时间越长,后洗脱,因而可以进行DL对映异构体的拆分。56以树脂或硅胶为载体,以氨基酸及其衍生物为手性选择子的手性配体交换色谱固定相已成功地应用于α2氨基酸的分离;另一方面,采用氨基酸-铜离子络合物作为手性流动相的反相色谱技术也实7,8现了α2氨基酸的手性分离。同样地,类似的手性固定相和手性流动相法也被应用于α2羟基酸的外消旋体分离。本文合成了3种手性配体交换色谱固定相用于α2羟基酸的分离,对不同手性固定相的分离性能进行了比较,并系统地考察了影响α2羟基酸分离的各种因素,从而最
5、终优选出最佳色谱分离条件,有关这方面的详细研究,国内外均未见报道。2 实验部分2.1 仪器与试剂高效液相色谱系统由Model441泵(美国Waters公司)、P2E785A型紫外可见波长检测器(美国2002208212收稿;2003201220接受本文系中国科学院百人计划资助项目第6期祝馨怡等α:2羟基酸在不同的手性配体交换色谱固定相上分离性能的考察651Perkin2Elmer公司)、C2R2A色谱数据处理器(日本岛津公司)和K501手动进样阀(10μL)组成。色谱柱尺7寸为250mm×4.6mmi.d.,用匀浆法在3.7×10Pa压力下填充。32缩水甘油丙基三甲氧基硅烷(KH-560)(上
6、海耀华玻璃厂),L2羟基脯氨酸、L2脯氨酸和L2苯丙氨酸(上海华美生物工程公司),对溴苦杏仁酸(复旦大学石油化工厂),苦杏仁酸(东京化成工业株式会2社),苹果酸(Fluka试剂公司),球形硅胶(自制),粒径5～6μm,比表面积240m/g,平均孔径9nm,其余试剂均为分析纯。2.2 实验方法2.2.1 流动相 (a)0.05molPLKH2PO4(pH4.5)20.1mmolPLCu(Ac)2;(b)0.1mmolPLCu(Ac)22H2O;(c)0.001molPLCuSO42H2O。2.2.2 固定相合成(1)32缩水甘油基丙基硅胶的合成 将4g硅胶120℃真空干燥4h,悬浮于30mL干燥
7、甲苯中,加入2mLKH2560,悬浮液回流反应8h,反应完毕,冷却,过滤,用甲苯、甲醇各洗涤3次,真空干燥,得32缩水甘油基丙基硅胶。该步合成关键是保证所有试剂绝对无水,全部操作均在干燥氮气保护下完成,反应式如下:OOSiOH+(CH3O)3Si(CH2)3OCH2CHCH2SiOSi(CH2)3OCH2CHCH2(1)(2)L2氨基酸硅胶键合固定相 将干燥的32缩水甘油基丙基硅胶悬浮于适量甲醇中
