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《甘氨酸对鲫鱼视网膜erg b-波和on型双极细胞活动的调制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、生理学报,1999年4月,51(2),121～127121ActaPhysiologicaSinica研究论文甘氨酸对鲫鱼视网膜ERGb2波3和ON型双极细胞活动的调制33徐祥敏 杨雄里(中国科学院上海生理研究所,中国科学院神经生物学开放实验室,上海200031)摘 要本工作在分离灌流的鲫鱼视网膜上研究了甘氨酸对明、暗视视网膜电图(ERG)b2波和胞内记录的ON型双极细胞反应的作用。结果表明,甘氨酸能明显压抑ERGb2波和ON型双极细胞的反应,其作用能为士的宁所翻转;甘氨酸对用谷氨酸分离的ERGPⅢ成分(光感受器
2、电位)无明显影响。这些结果提示,甘氨酸可能直接作用于双极细胞的受体,从而调节视网膜ON通路的活动。关键词:甘氨酸;视网膜电图(ERG)b2波;ON型双极细胞;调制作用;甘氨酸受体学科分类号:Q436 甘氨酸是脊椎动物中枢神经系统中一种重要的抑制性递质,参与对运动和感觉信息[1]的处理。在视网膜中,甘氨酸含量甚高,并能由光、高钾和兴奋性氨基酸刺激诱发释[2,3]放。在两栖类(蝾螈、爪蟾),已有研究表明,甘氨酸在外层视网膜的信号传递,特别[4]是对OFF通路有明显的调制作用,而且在双极细胞的中心2周围拮抗感受野的形
3、成起着[5]重要的作用。在金鱼视网膜,免疫组化研究表明,甘氨酸能神经元包括多种无长突细[6,7]胞、一种网间细胞等;这些细胞在不同程度上与双极细胞和无长突细胞形成突触联[8,9]系,提示甘氨酸有可能直接参与对双极细胞活动的调制。本工作在分离灌流的视网膜上研究了甘氨酸对暗视和明视视网膜电图(ERG)b2波以及ON型双极细胞的作用,并分析了其可能的作用部位及生理意义。1 材料和方法111 动物标本和灌流系统 鲫鱼(Carassiusauratus,Linne),叉长1315～18cm,从市郊鱼池捕获后饲养于室内水箱
4、中,循环水由气泵通气,日照条件同自然状况。实验前动物在1998203217收稿 1998205218修回3本项目获国家科委“攀登计划”《脑功能及其细胞和分子基础》、国家自然科学基金会(No139670253)、上海生命科学中心资助。33联系作者©1995-2005TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd.Allrightsreserved.122生 理 学 报 51卷暗室内暗适应1h左右,在暗红光下迅速摘取眼球,切除包含角膜和晶状体的眼球前半部后,将
5、眼杯倒置于滤纸,使视网膜与色素上皮层分离。分离后的视网膜连同滤纸置于灌流TM小室(光感受器面向上)进行灌流。灌流液在重力作用下或经蠕动泵(RaininRabbit2Plus,美国RaininInstrumentCo1Inc1)传输流入小室,在光感受器一侧平稳流经视网膜。灌流液的3切换由多通开关实现。小室容积018cm,灌流速度215m1/min,因此小室内的溶液可在30s内完全替换。正常灌流液(Ringer′s液)的组成如下(mmo1/L):NaCl116,KCl214,CaCl2112,MgCl2112,NaH
6、2PO4110,NaHCO328,葡萄糖10(以上试剂均为国产)。Ringer′s液在每次实验前用去离子水配制,并调节pH值至717;药物在实验前用新鲜Ringer′s液配制至所需浓度。实验时灌流液通以含95%O2和5%CO2的混合气。在这种实验条件下,视网膜一般可维持良好状态达4～5h。112 光刺激系统与记录系统 实验系统的光刺激器产生两平行光束(分别作刺激光和背景光)可同时投射至视网膜形成直径8mm的圆形光斑。光束的颜色和强度分别由干涉滤光片、中性滤光片改变。白光和单色光能量均由UDT光度计(UDT211
7、4A,美国UnitedDetector14Technology)测量。在视网膜水平未衰减刺激光强度(695nm,logI=0)为1158×10photons/22cm·s,未衰减白色背景光强度(logIB=0)为613μW/cm。文中光的强度均分别以此为基准,用相对对数单位表示。ERG记录电极为Ag2AgCl细丝,插人内含5%NaCl和112%琼脂的玻璃管,玻璃管尖直径为015mm,与视网膜光感受器一侧的灌流液相接触;参考电极为灌流小室底部的Ag2Ag2Cl银片。细胞内记录采用尖端小于015μm的玻璃微电极,由卧
8、式拉制器(日本Narishige,PD25)拉制,内充灌4mol/LKAc,在Ringer′s液中测定阻抗为100MΩ左右。ERG记录和胞内反应分别经前置放大器(FZG281,上海生理研究所,高频截止频率100Hz～3dB,时间常数ls)和微电极放大器(MEZ8201,NihonKohden)显示于示波器,由笔线记录仪(Graphtec,WR23801,频响0～70Hz±
