碱性艳蓝bo对凝胶上的dna的检测及相关检测机制的研究

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1、论文题EI：越：眭抱堇量Q过趟膣土坠丛△检测丞担差捡测扭剑数班究论文评阅人：答辩委员会主席：答辩委员会成员：论文答辩日期：沪／，3。j、．哆／，目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”1Abstract·····⋯··⋯··⋯·⋯·····⋯⋯··⋯···⋯·⋯·⋯-·⋯·⋯⋯·⋯·-·-·-3前雷⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”5第一部分VPBBO染料在琼脂糖凝胶上对DNA检测的应用研究材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．9结果与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．14小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23第二部分VPBBO染料在聚丙烯酰胺凝胶上对DNA检测的应用研究材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24结果与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．32第三部分VPBBO在DNA检测中的检测机理研究材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33结果与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．43附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、53综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54碱性艳蓝BO对凝胶上DNA的检测及相关检测机制的研究摘要目的：1．研究开发快速、灵敏、亲环境的DNA检测方法，为聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶上DNA的检测提供合适的方法；2．探究凝胶上DNA的检测机理，阐明VPBBO染料与核酸的相互作用，探讨了其作用方式和作用机理，将有助于人们从分子水平上了解检测机制。方法：1．DNA染料检测方法：选用碱性艳蓝BO(VPBBO)染料，考察影响检测结果的各个因素，如染色液的浓度及组成、染色时间、脱色时问及各种盐离子对检测结果的影响等，建立DNA染料检测操作步骤；2。

4、为了能更深入的研究染料检测的机理，通过采用光谱法、粘度法、分子对接模拟、质谱法等多种研究手段来共同研探究染料与DNA的相互作用。结果：1．分别在琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶上建立了DNA染料检测方法，灵敏度分别为0．4-0．8ng／band和O．8-1．6ng／band，其操作步骤分别如下：(1)琼脂糖凝胶a、染色：在25ml组成为O．005％VPBBO／10％醇／0．1％NaHC03的染色液中染色10min；b、脱色：在25ml组成为40％乙醇／1％乙酸脱色液中脱色3—5min。(2)聚丙烯酰胺凝胶a、染色：在50ml组成为0．001％VPBB

5、O染色液中染色10rain；b、水洗：在50mlDW中水洗1rain。2．通过采用光谱法、粘度法、分子对接模拟法、质谱法等多种研究手段来共同探究染料与DNA的结合机制，VPBBO染料和DNA以沟槽形式相结合。结论：1．新建立的DNA染料检测方法在琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶上的灵敏度分别为0．8—1．6ng／band和0．4—0．8ng／band，与EB荧光染色法相似；2．通过采用光谱法、粘度法、分子对接模拟法、质谱法等多种研究手段来共同研探究染料与DNA的结合的机制，VPBBO染料和DNA以沟槽形式相结合。通过阐明VPBBO染料与核酸的相互作用

6、，探讨了其作用方式和作用机理，将有助于人们从分子水平上了解检测机制。关键词：凝胶电泳；染料染色；DNA；结合模式；沟槽结合TheResearchofDNADetectioninGelbyVictoriapureblueBOanditsrelatedMechanismAbstractobjective：1．ToestablishappropriatedetectionmethodforDNAbothinagaroseandpolyacrylamidegels(PAGE)，whichisbrief,sensitiveandenvironmental

7、lybenign．2．ToexplorethestainmechanismofDNAbothinagaroseandPAGEgels，clarifythepattenofdyebondingbetweenVictoriapureblueBO(VPBBO)andnucleicacid，itwillhelppeopletounderstandthedetectionmechanisminmolecularlevel．Methods：1．Dye·basedstainforDNA：selectVPBBOinstainingsolutionandinve

8、stigatecompositionsofstaininganddestainingsolution，determinetheoptimalstain