琼脂糖凝胶上dna检测方法及相关检测机制的研究

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1、温州医学院硕士学位论文琼脂糖凝胶上DNA检测方法及相关检测机制的研究姓名：尤伟静申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：金利泰2012-05-22温州医学院硕士学位论文琼脂糖凝胶上DNA检测方法及相关检测机制的研究摘要目的t1．研究开发亲环境、灵敏、快速的DNA检测方法，为琼脂糖凝胶上小分子DNA的检测提供合适的方法；2．探究琼脂糖凝胶上小分子DNA的检测机理，阐明EY染料与核酸的选择键合作用及其键合机理，将有助于人们从分子水平上了解检测机制。方法：1．DNA负染检测方法：选用EosinY(EY)染料，考察影响检测结果的各个因

2、素，如染色液的组成、固定时间、染色时间、显影时间，重点考察盐离子对检测结果的影响，建立DNA负染检测操作步骤；2．为了更深入的研究检测机理，通过采用波谱法、电化学法、粘度法、分子对接模拟等多种研究手段来共同研探究染料与DNA的结合的机制。结果：1．建立了DNA负染检测方法，灵敏度达0．2-0．6ng／band，其操作步骤如下：(1)固定：电泳后，凝胶放入50ml固定液固定10min；固定液的组成为2．5％乙酸锌水溶液：(2)染色：在25ml染色液中染色30min；染色液的组成为O．4％EY／50％甲醇；(3)显影：在25ml显

3、影液中显影15min；显影液的组成为2．0％乙酸锌／1％柠檬酸。2．通过采用波谱法、电化学法、粘度法、分子对接模拟法等多种研究手段来共同探究染料与DNA的结合机制，EY染料和DNA以沟槽形式相结合。结论：1．新建立的DNA负染检测方法其灵敏度达0．2—0．6ng／band，可以和EB荧光染色法相媲美；2．通过采用波谱法、电化学法、粘度法、分子对接模拟法等多种研究手段来共同研探究染料与DNA的结合的机制，EY染料和DNA以沟槽形式相结合。温州医学院硕士学位论文通过阐明EY染料与核酸的选择键合作用及其键合机理，将有助于人们从分子水

4、平上了解检测机制。关键词：琼脂糖凝胶电泳；DNA；荧光染色；负染；机理温州医学院硕士学位论文TheResearchofDNADetectioninAgaroseGelanditsrelatedMechanismobjective：Abstract1．ToestablishappropriatedetectionmethodforDNAinagarosegels，whichisenvironmentallybenign，sensitiveandhighefficient；2．Toexplorethereversestainmec

5、hanismofDNAinagarosegels，clarifythepattenofdyebondingbetweenEosinY(EY)andnucleicacid，itwillhelppeopletounderstandthedetectionmechanisminmolecularlevel．Methods：1．ReversestainforDNA：selectEYinstainingsolutionandinvestigatecompositionsofstainingsolutionanddeterminetheo

6、ptimalfixingtime，stainingtimeandwashingtime．Focusingonthee疵ctsofvariousinorganicsaltsonstainresultstoexploreaprotocolforDNAreversestain；2．TOfullyunderstandtheinteractionpatternofEYandDNA，themechanismofdyebindingWasinvestigatedbyabsorption，fluorescecespectrum，cyclicv

7、oltammetry,viscositystudiesanddocking．ResnIts：1．AsensitiveandeasytechniquehasbeendevelopedforthevisualizationofDNAbyusingEY,whichcanformastablewater-solubleDNA-dyecomplexintheopaquegelmatrixcausedbytheprecipitationofEYdye．DNA，therefore，canbeselectivelyvisualizedastr

8、ansparentbands／spotsOilthebackground．Aslowas0．2-0．6ng／bandofDNAcanbevisualizedin1hbyusingthenewdevelopedprotocol，similarwithEB．Thereverses