β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁抗食管癌活性与机制研究

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1、分类号：___________密级：__________UDC：___________β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁抗食管癌活性与机制研究姓名：张震学号：2111540145院系：药学院学位类型：专业学位专业：药学研究方向：药物研发与转化导师：王治平论文提交日期：2018年5月25日论文答辩日期：2018年5月12日学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月IStudyontheeffectandmechanismofβ-acetoxyisovalerylalkaninonesophagealsquamo

2、uscellcarcinomaCandidate：ZhangzhenStudentID：2111540145Affiliation：SchoolofpharmacyAcademicDegreeApliedfor：ProfessionaldegreeofpharmacySpeciality：PharmacySupervisor：Prof.WangzhipingAssistantSupervisor：Prof.WangyifeiDayofDefence：May2018Degree-Conferring

3、-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversity52018IIIIIβ-乙酰氧基异戊酰阿卡宁抗食管癌活性与机制研究摘要食管癌作为一类常见的消化道恶性肿瘤，严重危害着人类的生命健康。而我国是食管癌最高发国家之一，所占食管癌患者接近世界半数。食管癌具有难发现、治疗效果差、致死率较高的特点，目前主要采取手术为主、化疗为辅的治疗方式。但由于现临床使用的化疗药物具有选择性差、毒性大、易产生耐药等缺点，给食管癌的治疗带来一定困扰。因此，越来越多的科研学者寄希望于从植

4、物中提取具有作用较强、选择性较好的天然化合物用于肿瘤的治疗。紫草素类化合物是一种从紫草的根部提取的天然萘醌化合物，近些年关于其抗肿瘤作用的研究受到越来越多科研工作者的关注。β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁（β-acetoxyisovalerylalkanin，β-AIVS）也是天然提取的紫草素类化合物，目前还没有关于其抗肿瘤活性的报道。目的：为了探究β-AIVS对食管癌细胞增殖的影响，并探讨其体外抗食管癌作用的分子机制。本文主要从以下几个方面进行体外抗肿瘤的研究：1.采用MTT法检测β-AIVS对5株食管

5、癌细胞系的增殖抑制作用，并从中选定两株对β-AIVS敏感性较强的细胞系作为本论文主要体外抗肿瘤作用的研究对象；IV2.采用细胞集落形成实验进一步研究β-AIVS抑制食管癌细胞增殖的作用。采用细胞划痕法评价β-AIVS对食管癌细胞迁移的影响。通过Hoechst33342染色法检测β-AIVS对食管癌细胞形态学的改变；3.采用流式细胞术检测β-AIVS对两株细胞凋亡、周期、线粒体膜电位的影响。采用DCFH-DA荧光探针法检测细胞内ROS的生成，通过流式细胞术和荧光显微镜观察β-AIVS对食管癌细胞内R

6、OS生成的影响；4.为初步筛选β-AIVS促食管癌细胞凋亡的分子机制，通过β-AIVS分别与抑制剂Z-VAD-FMK、STF-083010和ROS清除剂NAC共同作用于食管癌细胞，观察细胞凋亡的情况；5.采用Westernblot检测β-AIVS对Caspase家族、Bcl-2家族以及MAPK家族蛋白表达的影响，从而探究β-AIVS促食管癌细胞发生凋亡作用的分子机制。实验结果：1.MTT法的结果发现，β-AIVS对5株食管癌细胞均具有明显的抑制增殖作用，综合考虑细胞的敏感性和本身增殖速率的同步性，

7、我们选取Kyse140和Eca109这两株细胞进行后续研究；2.细胞集落形成实验证明，β-AIVS具有抑制食管癌细胞集落形成的能力。细胞划痕法也发现β-AIVS能够在体外抑制食管癌细胞的迁移。而对细胞形态学观察发现，在β-AIVS作用下，细胞具有明显的凋亡特征；V3.流式细胞术的结果表明，β-AIVS促进食管癌细胞发生凋亡，使线粒体膜电位下降，而对细胞周期没有明显影响，同时β-AIVS也能促进细胞内ROS的生成；4.通过流式细胞术初步的机制筛选发现，ROS清除剂NAC基本能够逆转β-AIVS的促凋

8、亡作用，抑制剂Z-VAD-FMK能够部分减弱β-AIVS的促凋亡作用，而抑制剂STF-083010基本没有影响；5.Westernblot检测结果证明，β-AIVS能够引起Caspase级联反应，作用于Bcl-2家族中的蛋白，上调促凋亡蛋白的表达，并下调抗凋亡蛋白的表达。同时也能明显促进MAPK家族中JNK的磷酸化。结论：β-AIVS能够明显抑制食管癌细胞的增殖、集落形成和迁移作用，促进细胞发生凋亡，增加细胞内ROS的生成。β-AIVS激活Caspase级联反应，通过线粒体途径和R