用于多模态分子影像含双报告基因的腺病毒载体的构建及鉴定

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1、分类号：R8单位代码：10752密级：公开学号：2010250宁夏医科大学硕士研究生学位论文用于多模态分子影像含双报告基因的腺病毒载体的构建及鉴定ConstructionandIdentificationofAdenoviralVectorwithDualReporterGeneforMultimodalityMolecularImaging学位申请人：王一帆指导教师：郭玉林教授合作指导教师：郜发宝教授申请学位门类级别：医学专业名称：影像医学与核医学研究方向：分子影像所在学院：临床医学院论文完成日期：二〇一三年四月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThe

2、sisforApplicationofMaster’sDegreeConstructionandIdentificationofAdenoviralVectorwithDualReporterGeneforMultimodalityMolecularImagingStudent’sName:WangYifanSupervisor:Prof.GuoYulinAssistantsupervisor:Prof.GaoFabaoSubjectCategory:MedicineMajor:RadiologyandNuclearSpecialty:MolecularImagingCollege:Cl

3、inicalInstituteCompletionDate:Apr.2013宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和

4、电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日书脊的书写学位论文的书脊用小三号仿宋字书写，上方写论文题目，下方写申请人姓名，距上下页边均为5cm，如下图：页边5cm学号题目姓名5cm页边2010250用于多模态分子影像含双报告基因的腺病毒载体的构建及鉴定王一帆宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要用于多模态分子影像含双报告基因的腺病毒载体的构建及鉴定摘

5、要目的构建含有由人转铁蛋白受体基因（TFRC）和萤火虫荧光素酶基因（Luc）组成的双报告基因的重组腺病毒载体（Ad），为磁共振（MR）和生物发光双模态分子成像提供一个全新的实验工具。方法从psiCHECK-2质粒中用聚合酶链式反应(PCR)扩增Luc基因，克隆入腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV后行NheⅠ/XbaⅠ双酶切和测序鉴定。然后利用PCR扩增TFRC基因，克隆到pShuttle-CMV-CMV-Luc穿梭载体的多克隆位点区，进行SfiⅠ酶切和测序鉴定，得到的重组穿梭载体pShuttle-TFRC-Luc再与腺病毒骨架载体（pAdeno）同源重组，然后将XhoⅠ酶切鉴定正确的

6、重组病毒质粒经293细胞包装纯化并行PCR鉴定，测定其病毒滴度。用获得的重组腺病毒Ad-TFRC-Luc感染人结直肠癌LOVO细胞，转铁蛋白受体(TfR)和荧光素酶蛋白的表达分别用免疫蛋白印迹（westernblot）、实时荧光定量PCR法和体外生物发光成像来检测。结果转铁蛋白受体基因正确重组到携带有荧光素酶基因的腺病毒载体中，测序结果与GenBank序列完全一致，酶切鉴定结果显示均能得到与理论大小相符的2.3kb片段。10Ad-TFRC-Luc重组腺病毒构建成功，病毒滴度达1.6×10pfu/ml，感染LOVO细胞48小时后转铁蛋白受体和荧光素酶蛋白的表达水平显著增加，差异均有统计学意

7、义（P<0.01）。结论Ad-TFRC-Luc重组腺病毒构建成功，可用于下一步的多模态活体成像示踪肿瘤生长、基因治疗以及移植干细胞。关键词腺病毒，转铁蛋白受体，荧光素酶，报告基因，分子影像I宁夏医科大学硕士研究生学位论文英文摘要ConstructionandIdentificationofAdenoviralVectorwithDualReporterGeneforMultimodalityMolecularImagingABSTR