涡鞭毛虫(甲藻)着丝粒动粒蛋白的检查

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1、维普资讯http://www.cqvip.como一一一2-，7动物学研究1996，17(3)：∞7—313CN53—1040,"QISSN0254--5853ZoologicalResearch涡鞭毛虫(甲藻)着丝粒／动粒蛋白的检查吴传芬主堕壅弋／代嘉陵王永潮(①北京师范大学生物系北京】00875)’仁(霪中国科学院昆明动物研究所细胞与分f进化开放研究实验宅，摘要利用ACA血清、抗人着丝粒蛋白B的单抗和多抗、抗CHO细胞动粒蛋白的单抗，对典型涡鞭毛虫隐淘虫(隐甲藻)(Crypthecodiniumcohnii)和特殊涡鞭毛虫尖尾虫(尖尾藻)(Oxyrrhismarina)的着丝粒／动粒蛋白进

2、行了检壹：用ACA血清作的蕞光观察表明．隐沟虫的这些蛋白虽结台在核骨架上，但在问期州并不形成点状的前着丝粒。免疫印迹检查表明两种涡鞭毛虫的着丝粒蛋白B设此一致，而目．与四膜虫和眼虫的也高度一致但用ACA血清作免疫印迹检在时，尖尾虫的蛋白虽与四膜虫和暇虫的相近．j隐淘虫的却有极大的差异。以抗动粒蛋白的单抗作此种检查时，尖尾虫与限虫的反应带相同，而隐沟虫则与源真棱生物(Archezoa)贾第虫(Giardialamblia)的相同；而且隐沟虫和贾第虫都与几种原细菌有两条相同的反应带，其中50kD的一条是尖尾虫和眼虫都没有的。t述发现不仅从一个新的方面支持了认为应把尖尾虫从典型涡鞭毛虫分出来独立为一

3、个门的主张(李靖炎，1990)，而且指出典型涡鞭毛虫在后真棱生物(Metakaryota)中间是非常原始的。关键词塑至兰甲藻的分类，隐沟虫，尖尾虫’一二莹丝塑竺重皂：免疫印迹．涡鞭毛虫(甲藻)是一类极其特殊的单细胞真核生物。其染色体不仅在细胞周期中始终保持浓聚状态，而且在结构上相似于原核生物的类核体，并且像后者一样也不含组蛋白。因此我们曾把它们的核用作原始性细胞核的模型但是如夸看来这是不妥的，一则从细胞生物学和分子生物学的午多特征来看，涡鞭毛虫并非现存的最原始的真核生物；二则其染色体在结构上只是与真细菌类的类核体相似，并非与原细菌类的类棱体相似，然而真核细胞却显然是从占代的原细菌起源的；第三个

4、决定性的事实是，涡鞭毛虫染色体碱性蛋白在一级结构上与组蛋白相距甚远，而在产甲烷原细菌中已经找到了与组蛋白密切相关的“组蛋白相关蛋白”(histone—relatedproteins)。这些都说明涡鞭毛虫染色体的种种特殊之处其实是次生性的，而并不是原始的性状。但无论如何，涡鞭毛虫毕竟是一类很低等的真核生物。我们所作的5．8SrRNA分子进化研究(李靖炎，1992)表明，它们虽比源真核生物Archezoa高等，但却可能是后真核生物(Metakaryota)中间最低等的一类因此检查它们的着丝粒蛋白仍是很有意义的。·通讯作者本文1995年84H收到、同年I】月28日修回维普资讯http://www.c

5、qvip.com308动物学研究I7卷此外，从认识特殊涡鞭毛虫尖尾虫(Oxyrrhis)的进化地位，检查其着丝粒蛋白也是很有价值的，因为这是一类非常保守的蛋白。著名原生动物学家J．0Corliss(1983)把涡鞭毛虫类划分为两个门，一个是典型涡鞭毛虫，另一个则以特殊涡鞭毛虫(Syndinium)为代表但李靖炎实验室的多年工作表明，尖尾虫距离典型涡鞭毛虫还更远。例如Svndinium的核分裂显然只是涡鞭毛虫核分裂(dinomitosis)的一种变形，而尖尾虫的核分裂却是相距甚远的核内有丝分裂(高小平等，1986)。因此显然更为恰当的是把尖尾虫独立为一个门，而把Syndinium作为典型涡鞭毛虫

6、门的一个亚门(李靖炎，1990)张超英等，1996)。本工作检查和比较了尖尾虫和典型涡鞭毛虫的着丝粒蛋白，结果发现它们相距甚远，从而为尖尾虫独立为一个门的主张增添了又一个有力的新证据。1材料与方法I_1材料及培养寇氏隐沟虫(隐甲藻)(Crypthecodiniumcohnii)和尖尾虫(藻)(Oxyhhrismarina)虫种及培养方法均由中国科学院昆明动物研究所进化细胞生物学实验室提供。前者用E6培养基在20"C左右作无菌悬浮培养(Stein，1973)，后者培养方法也由该实验室提供(孙毓麟等，1978)。对照材料人喉癌培养细胞Hep~l用1640培养基，加八谷氯酰胺至0．03％、胎牛血清至

7、10％、青霉素和链霉素分别至100U／ml，在37℃CO，培养箱内用培养瓶作单层贴壁培养。1．2方法1．2．1细胞核的分离(1)Hep~l细胞的核分离收集对数生长的培养细胞，用PBS液洗涤3次，加^RSB掖(0．01MTris—HC1，0．01MNaC1，1．5mMMgC1，，pH7．4)，加入200mMPSF至终浓度为1mM，搅匀后冰浴放置。每5rain用次甲蓝(0．01％)染色检查1次，约40