盘针孢菌发酵及其胞外多糖抗氧化活性

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1、ShortCommunication研究简报微生物学报ActaMicrobiologicaSinica48(10)：1398~1402;4October2008ISSN0001-6209;CN11-1995/Qhttp://journals.im.ac.cn盘针孢菌发酵及其胞外多糖抗氧化活性11112叶明，李世艳，张利兵，蒋艳，庄文颖1（合肥工业大学生物与食品工程学院，合肥230009）2（中国科学院微生物研究所真菌地衣系统学重点实验室，北京100080）摘要：【目的】研究盘针孢菌的发酵条件及其胞外多糖(EPS

2、)抗氧化活性。【方法】分别研究碳源、氮源、生长因子、pH值和培养时间等条件对盘针孢菌多糖产量的影响作用，并通过测定其多糖的还原能力及对羟自由基（·OH）和1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH）自由基的清除作用研究该多糖的抗氧化活性。【结果】盘针孢菌多糖发酵的最佳条件为20%的马铃薯浸汁，20g/L麦芽糖，5g/L(NH4)2SO4，0.01g/LL-胱氨酸，pH5.0，25℃下培养10d。在此条件下，多糖产量达到37.52mg/L，与在基础发酵培养基条件下相比，其多糖产量提高了84.10%。盘针孢菌多糖对·OH和D

3、PPH自由基均有较好的清除作用，在多糖浓度为50mg/L时，对·OH的清除率达到50.81%；多糖浓度为20mg/L时，对DPPH自由基的清除率达到14.21%。【结论】发酵条件对盘针孢菌多糖代谢具有重要的调控作用，且该多糖具有明显的抗氧化活性。关键词：盘针孢属；胞外多糖；抗氧化活性中图分类号：TQ929.2文献标识码：A文章编号：0001-6209(2008)10-1398-05自20世纪50年代末人们发现多糖抗肿瘤活性以大学微生物资源与应用研究室分离保藏菌种。来，产多糖真菌的研究受到越来越广泛的重视[1]。

4、研究[6]1.1.2培养基：改良PDA培养基：20%的马铃薯浸表明多糖在抗肿瘤、抗炎、抗病毒、降血糖、抗衰老、汁，蛋白胨5g，葡萄糖20g，琼脂15g，蒸馏水定[2]抗凝血等方面发挥着生物活性作用。近几年，微生物容至1000mL，自然pH；基础发酵培养基：改良PDY多糖越来越受到人们的青睐。利用微生物生产多糖可以培养基(不加琼脂的改良PDA培养基)；20%的马铃薯不受季节变化的影响，微生物多糖的收集与纯化相对于浸汁的制备：将马铃薯200g洗净去皮切片，加蒸馏水[3]植物和海藻多糖更容易。微生物多糖结构、性能各异

5、，1000mL煮沸半个小时，4层纱布过滤，滤液于4℃下冷可供选择余地大，与植物相比，更通过生物工程技术定藏24h，5000r/min离心，弃沉淀得到的上清液即20%向改变微生物的遗传特性，从而生产出预定的多糖产品。的马铃薯浸汁（经测定其淀粉含量为0.53%）。目前，国内外对盘针孢属(Libertella)的研究主要1.1.3主要试剂和仪器：2,6-叔丁基对甲酚(BHT，德[4,5]集中在萜类毒素和其它生物碱类产物方面。本研国进口分装)，1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH，Sigma），究首次对一株盘针孢菌的发酵条

6、件及其胞外多糖的L-色氨酸、L-胱氨酸、甘氨酸和L-酪氨酸等均为国产体外抗氧化活性进行研究，以期为盘针孢菌多糖的研分析纯。RE-85Z旋转蒸发器（上海青浦沪西仪器厂），发和工业化生产奠定基础。TDL-50B离心机（上海安亭科学仪器厂），721E型可见光光度计（上海禾工科学仪器有限公司）。1材料和方法1.2菌种培养1.1材料取斜面保藏菌种，接入PDA平板培养基上活化1.1.1菌株：盘针孢菌(Libertella)YM-28，合肥工业8d，作为发酵的种子。基金项目:安徽省自然科学基金项目(050430502);安徽

7、省重点科研计划项目(07020303053)作者简介:叶明(1959−),博士,教授,硕士生导师,主要从事微生物资源与应用研究。E-mail:yeming123@sina.com收稿日期:2008-03-18;修回日期:2008-05-19叶明等：盘针孢菌发酵及其胞外多糖抗氧化活性./微生物学报(2008)48(10)13991.3多糖的测定测定：参照文献[9]。[7]1.5.2YM-28胞外多糖对DPPH自由基的清除作用：参考姚良同等方法，略作修改，得回归方程为−4y=1.0222x−0.0073。将50mL

8、发酵液过滤，滤液浓缩，将不同浓度的多糖溶液2mL与2mL2×10mol/L加2倍体积的无水乙醇，4℃下醇沉。离心除去上清，DPPH溶液均匀混合，30min后在525nm处测定其吸−4沉淀依次以无水乙醇，丙酮，乙醚洗涤，真空干燥得光度Ai，同时用同法测定2mL2×10mol/LDPPH溶胞外多糖(EPS)粗品。液与2mL蒸馏水混合后的吸光度Ac，以及2mL不同将EPS粗品蒸馏水溶解并定容