燃煤型氟中毒雌鼠卵巢细胞凋亡及机制研究

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1、贵阳医学院2013届硕士研究生论文《中国图书资料分类法》分类号单位代码：10660R12学号：S100086贵阳医学院2013届硕士学位论文燃煤型氟中毒雌鼠卵巢细胞凋亡及机制研究研究生：徐静峰导师：夏曙华教授年级：2010级专业：临床检验诊断学2013年5月20日1贵阳医学院2013届硕士研究生论文目录摘要„„„„„„„„„„„„„„3前言„„„„„„„„„„„„„„4材料与方法„„„„„„„„„„„„5结果„„„„„„„„„„„„„„18讨论„„„„„„„„„„„„„„30结论„„„„„„„„„„„„„„34创新点„„„„„

2、„„„„„„„„„35参考文献„„„„„„„„„„„„„35英文摘要„„„„„„„„„„„„„37致谢„„„„„„„„„„„„„„39略缩词表„„„„„„„„„„„„„40论文原创性声明„„„„„„„„„„41附：综述„„„„„„„„„„„„422贵阳医学院2013届硕士研究生论文燃煤型氟中毒雌鼠卵巢细胞凋亡及机制研究专业：临床检验诊断学研究生：徐静峰导师：夏曙华教授中文摘要摘要：【目的】动态观察燃煤型氟中毒诱导雌鼠卵巢细胞凋亡并探讨其致卵巢细胞凋亡机制。【方法】1.采用自由食用织金病区原煤加拌泥煤烘烤的玉米复制燃煤型氟中毒动

3、物模型（对照组、中氟组、高氟组）；2.动态观察雌鼠染氟期间牙齿的变化情况；3.采用离子选择电极法、高温灰化-氟离子选择电极法测定雌鼠尿氟、骨氟含量；4.于不同时间段（60d、120d、180d）动情期处死雌鼠，分离卵巢。①称重，计算卵巢的脏器系数。②电镜下观察卵巢组织亚微结构及颗粒细胞凋亡情况。③用TUNEL技术检测卵巢颗粒细胞凋亡细胞数。④采用比色法测定雌鼠新鲜卵巢组织中SOD、MDA的含量变化。⑤用免疫组化法检测卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白Fas、Caspase-3的表达。【结果】1.成功复制实验动物模型。2.随着染氟剂量增加

4、以及染氟时间的延长，雌鼠氟斑牙症状逐渐加重。3.雌鼠尿氟、骨氟的含量随着染氟剂量的增加以及染氟时间的延长而增加。4.各组别在不同染氟时间卵巢脏器系数比较均无统计学意义(P>0.05)。5.染氟组的卵巢组织亚微结构产生变化，颗粒细胞出现凋亡。6.各对照组仅有少量的凋亡细胞，染氟组随着染氟剂量的增加和时间的延长，凋亡细胞数明显呈上升趋势。7.在染氟时间相同的情况下，随着染氟剂量的增加，SOD活性显著性降低，MDA的含量显著性升高；在染氟剂量相同的情况下，随着染氟时间的延长，SOD含量和MDA含量的变化无统计学意义(P>0.05)。

5、8.随着染氟时间的延长，染氟组雌鼠卵巢组织Fas蛋白含量增加，各组两两比较均具有统计学意义（P<0.05）。在染氟剂量相同的实验中，中氟组各组两两比较均具有统计学意义（P<0.05）,其他组别比较无统计学意义。9、染氟组卵巢颗粒细胞Caspase-3蛋白表达量与对照组相比均升高，但在180d时高氟组卵巢颗粒细胞Caspase-3蛋白表达量比中氟组蛋白表达量减少。【结论】1.氟中毒对卵巢生殖功能的毒性作用的强弱与染氟剂量、时间有关；2.氟可损害雌鼠自由基代谢和抗氧化系统功能，损害程度与染氟剂量关系密切，与染氟时间关系不大；3.氟

6、中毒诱导卵巢颗粒细胞氧化损伤能促进凋亡相关蛋白Fas的表达和激活Caspase-3活性来诱导卵巢颗粒细胞凋亡，推测这可能是氟中毒对卵巢损伤的重要机制之一。3贵阳医学院2013届硕士研究生论文关键词：燃煤型氟中毒；雌鼠；卵巢；细胞凋亡；机制;前言地方性氟中毒(EndemicFluorosis)是由于一定地区环境中氟元素含量过多，而致生活在该环境中的居民经饮水、食物、空气等途径长期摄入过量氟所引起的，以骨相损害为主要特征的一种慢性全身性疾病。地方性氟中毒是一种全球流行的地方病，我国的病情尤其严重。据调查，我国地方性氟中毒分布于13

7、00多个县，暴露于高氟环境中的人口约2.6亿人，被称为世界上最大的地方性氟中毒多发地带。地方性氟中毒根据氟源和人体摄氟的不同途径，大体上可分为饮水型、燃煤污染型、饮茶型三种。贵州省特别是西北部地区，煤炭资源丰富和自然条件限制，当地居民主要以煤炭为取热资源和烘烤食物(玉米和辣椒)，引起当地患氟斑牙，氟骨症现象尤为突出，致使贵州成为我国燃煤型氟中毒病情最为严重的省份。从1901年Eager报道了氟化物对人类的危害到20世纪80年代，大多数学者多以氟对牙齿、骨骼等骨组织的损伤为研究重点。近20多年来，国内外学者开[1-3]始关注氟对

8、非骨相毒性的研究，其中包括燃煤型氟中毒对中枢神经系统、儿[4]童智力水平及体格发育的影响等。随着对燃煤型氟中毒研究的不断深入，燃煤型氟中毒对生殖毒性研究逐渐成为热点。目前大量的研究表明氟对雄性生殖内分泌系统存在多方面的影响，但对雌性生殖作用及机制的有关研究甚少。近年来氟中毒对