橡胶树顺式-异戊烯基转移酶基因转录因子克隆及表达

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3、烯聚合而成的高分子量聚合物。胶乳的前体是类异戊二烯，大多数的类异戊二烯前体都是C5复合物异戊烯基焦磷酸(IPP)和它的异构体二甲(基)丙烯基焦磷酸(DMAPP)，目前研究表明，口P和DMAPP可以通过MVA途径和MEP途径合成。从橡胶合成的途径分析，参与橡胶生物合成的关键酶包括IPP异构酶和一系列异戊烯基转移酶，如FPP合成酶，GGPP合成酶，橡胶转移酶(I盯)等。根据橡胶树顺式．异戊烯基转移酶(橡胶转移酶)基因HRTl的序列设计引物，利用GenomeWalking方法从巴西橡胶树的基因组中克隆了HbRT基因的5’调控序列，并将HbRTI5’调控序列构建到酵母诱饵

4、载体。通过酵母单杂技术获得了3个具有转录活性的转录因子，分别命名为HbRZ、HbEIN和珊^彳yC。生物信息学分析表明，HbRZ编码的蛋白质有156个氨基酸组成，分子量17．5kDa，理论等电点5．92。氨基酸序列分析表明，HbRZ含有典型的Zincfinger结构域，属于ZIP蛋白，该氨基酸序列与蓖麻(Ricinuscommunis)、葡萄(Vitisvinifera)、大豆(Glycinemax)、杨毛果(Populustrichocarpa)的ZIP同源性分别达到66％、62％、62％和62％。HbEIN编码的蛋白质有620个氨基酸组成，分子量70．40kD

5、a，理论等电点5．70。氨基酸序列分析表明，HbEIN含有典型的EIN3superfamily结构域，属于EIN3类蛋白，该氨基酸序列与蓖麻(Ricinuscommunis)、毛果杨(Populustrichocarpa)、甜瓜(Cucumismelo)、烟草(Nicotianatabacum)、豇豆(Vignaradiata)的EIN家族类转录因子的同源性分别达到88％、82％、76％、71％和70％。HbMYC编码的蛋白质有476个氨基酸组成，分子量53．76kDa，理论等电点5．73。氨基酸序列分析表明，HbMYC含有典型的E．box／N—boxspecif

6、icitysite，centromere-bindingprotein1，cbp一1，HLHsuperfamily结构域，属于HLH类蛋白，该氨基酸序列与蓖麻(Ricinuscommunis)、葡萄(Vitisvinifera)、毛果杨(Populustrichocarpa)、甘蓝型油菜(Brassicaoleracea)、拟南芥(Arabidopsisthaliana)的HLH家族类转录因子的同源性分别达到67％、64％、60％、43％和41％。半定量RT-PCR结果显示：HbRZ在不同组织中的表达量存在差异，胶乳中大量表达，叶片中次之，花中表达最低。HbEIN

7、在不同组织中的表达量也存在差异，在树皮中的表达量最大，叶和芽中的表达次之，花中几乎不表达。HbMYC基因在不同组织中的表达量也存在差异，在胶乳中大量表达，芽和树皮中次之，叶和花中几乎不表达。乙烯对胶乳月搬ZHbEIN,HbMYC的表达基本无影响，而茉莉酸处理后胶乳HbRZ的表达下调，HbEIN的表达基本也无影响，HbMYC的表达呈现先上调到2h处理的胶乳样品到达最峰值，再呈现出逐步下调的趋势。关键词：巴西橡胶树，顺式．异戊烯基转移酶基因，橡胶转移酶，酵母单杂交，转录因子，RT．PCRIIAbstractNaturalrubberiswhitelatexbyHeve

8、abras