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《罗非鱼β-肌动蛋白基因启动子的分离及其转录启动功能检测》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2008,16(2):242~247·研究论文·罗非鱼茁肌动蛋白基因启动子的分离及其启动子活性的初步检测*1,21**, 王海英1,21111郁二蒙, 叶星,白俊杰, 夏仕玲,劳海华, 卢迈新（1.中国水产科学研究院珠江水产研究所,广州510380；2.上海水产大学生命科学技术学院，上海200090）摘要：采用高保真PCR技术从尼罗罗非鱼（）基因组中分离了茁肌动蛋白（）基因片段（GenBank登录号：EF026001）。序列分析显示该片段包括长为1643bp基因5'端侧翼区的启动调控区和90bp
2、的部分转录区序列。启动调控区包括一段长为108bp基因上游调控序列、基因不翻译的第1个外显子和第1个内含子。上游调控序列中含有与转录活性密切相关的作用元件：CAATbox，TATAbox和CArGbox，分别位于转录起始位点上游的原92、原29和原62处。将尼罗罗非鱼基因的启动调控区定向克隆到不含启动子的红色荧光表达载体pDsRed21中，构建了重组荧光表达载体。重组载体经R玉线性化后，采用显微注射技术将其注射到唐鱼（）的受精卵中，利用荧光显微镜观察外源基因增强型红色荧光蛋白基因（）在唐鱼中的表达。结果表明，在荧光显微镜下以及普通解剖镜下均可观察到红色荧光，说明本实验分离到的罗
3、非鱼基因启动子序列具有有效的驱动功能。关键词：罗非鱼；茁肌动蛋白启动子；红色荧光蛋白；转基因；显微注射中图分类号:S188文献标识码:A 文章编号:10061304(2008)02024206IsolationofNileTilapia（）Promoter andAssayofItsTranscriptionActivityYUErmeng 1,2,YEXing 1**,WangHaiying 1,2 ,BAIJunjie 1,XIAShiling 1, LAOHaihua1,LUMaixin 15'flankingregionandpartialopenreadingfram
4、e(ORF)ofgene（GenBankaccessionNo.EF026001)ofNiletilapia（）wasclonedbyPCRamplification.Thesegmentincluded1643bpregulatorysequenceand90bppartialORFwhichencodeda30aminoacidspeptide.Theregulatorysequencecontained108bp5'proximalpromoter，thefirstuntranslatedexonandthefirstintronofgene.Theproximalpro
5、moterregioncontainedelementsthatwerecriticalfortranscriptionactivity,includingtheCCAATbox，TATAboxandCArGboxwhichlocatedat原92，原29and原62bpupstreamoftranscriptioninitiationsite,respectively.TheregulatorysequencewasinsertedintothepromoterlesspDsRed21vectortoconstructexpressingvector pNA.Thelinea
6、rizedpNAwasmicroinjectedintothefertilizedeggsofwhitecloudmountainminnow（）.Theexpressionofgeneintransgenicfishcouldbeobservedundermicrofluoroscopeandanatomicallens.Theresultsshowedthatthe genepromoterpossessedeffectivetranscriptionactivity. Niletilapia；genepromoter；redfluorescentprotein(DsRed
7、2)；transgene；microinjection启动子是转基因生物制作过程中表达载体构件发中（叶星等,2007）。基因为管家型基因，的重要组分。鱼类中使用较多的启动子为茁肌动蛋其启动子具有广泛启动表达的功能，具有与白()、抗冻蛋白（）、金属硫蛋白（）等早期启动子相当甚至更强的启动转录活性（Robert 基因的启动子，组蛋白H3、核糖体蛋白L18、热休克,1989）。鲤鱼（）的启动蛋白HSP70等基因的启动子近年来也正在研究开子是鱼类中第1个被分离到的启动子，已证明其具*基金项目：广东省
