cmo启动子盐诱导功能元件鉴定及转录因子分离

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1、学位论文独创性声明IIIIIIllllllIIlill!IIIIIIY1890726本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加以标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均已在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位论文作者签名：盔星受拖学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解辽宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学

2、，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相～致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者签名：耋芒置垫指导教师签名：签名日期：阳ff年歹月g日辽宁师范大学硕士学位论文摘要甜菜碱是植物体内的一种无毒渗透保护剂，它的积累使代谢中的许多重要酶类在渗透胁迫下能保持活性，保证植物正常生长。胆碱单加氧酶(CMO)是指导合成甜菜碱的关键酶。CMO基因的表达受其上游启动子及转录因子的调控，转录因子与启动子上的顺式作用元

3、件相互作用，促进下游基因的表达。本文通过对CMO启动子盐诱导元件及与其结合的转录因子进行研究，分析CMO基因转录调控的机制。本论文通过凝胶迁移分析实验找到了CMO启动子区段中盐诱导功能元件，以盐诱导功能元件为诱饵，通过酵母单杂交实验分离得到了可能与之结合的转录因子，主要结果如下：1、用Genomatix软件对已知的辽宁碱蓬CMO启动子序列(-267,-,+128bp)进行功能元件分析，发现在该序列上存在11个与非生物胁迫相关的顺式作用元件。从中选定了4个与盐诱导表达相关的元件：W．Box、Salt／droughtres

4、ponsiveelement、GT-1c／s．element和MYB元件用于凝胶迁移分析实验。2、以选定的4个元件为核心序列设计探针，与辽宁碱蓬叶片核蛋白结合，经凝胶阻滞分析，发现有2条探针具有阻滞信号，初步认为Salt／droughtresponsiveelements和MYB元件是CMO启动子中盐诱导相关的功能元件。3、从获得的2个盐诱导功能元件中选取Salt／droughtresponsiveelement作为诱饵，将该元件的三串联体构建到酵母菌株中获得诱饵酵母菌株，同时构建辽宁碱蓬叶片eDNA文库，经酵母单杂交

5、实验，筛选出阳性克隆，经测序及序列比对分析，获得了1个与Salt／&oughtresponsiveelement相互作用的转录因子，该转录因子可能是PAPA．1一likefamilyprotein

6、zincfinger(HIT)familyproteino关键词：辽宁碱蓬；CMO启动子；盐诱导元件；转录因子；凝胶迁移分析；酵母单杂交辽宁师范大学硕士学位论文Identificationofsalt--inducedc／s--elementsinCMOpromoterandSeparationofTranscription

7、factorsinteractingwiththec／s—elementsAbstractBetaineisanon-toxicpenetrationofprotectiveagentsinplants．Itsaccumulationmakesmanyimportantenzymesofmetabolismkeepactivityunderosmoticstress，andprotectthenormalgrowthofplants．Cholinemonooxygenase(CMO)isthekeyenzymeforb

8、etmnesynthesis．CMOgeneexpressionisregulatedbyupstreampromoterandtranscriptionfactors．Theinteractionbetweentranscriptionfactorsandpromoterc／s．actingelementspromotetheexpressionofgenesdownstream．Inthispaper，thesalt-relatedc／s-actingelementsinCMOpromoterandtheirbin

9、dingtranscriptionfactorswerestudied，andtranscriptionalregulationmechanismofCMOgenewasanalyzed．111iSthesisfindssalt—relatedc／s-actingelementsinCMOpromoterbyelectrophor