沟叶结缕草愈伤组织再生体系的优化

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1、沟叶结缕草愈伤组织再生体系的优化论文作者签名：指导教师签名：论文评阅人：塍云文教授浙江太堂国艺丕盆昌态教援逝江太堂国艺丕楼建垡高工杭州植物园答辩委员会主席：搂晓明教授级高工杭划直园文局．．答辩委员会委员：夏宜垩教授逝延太堂国挞砑究压固挝至副教授逝江太堂国挞班究压柴明良副教授、逝江太堂园挞班究压浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝姿盘鲎或其他教育机构的学位或证

2、书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解滥婆太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝'江盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日致谢能够完成学业和论文，我首先应该感谢

3、导师柴明良副教授。他不仅是一位治学严谨、学识渊博的学者，更是一位和蔼可亲的长者，也是一位真挚的朋友。近三年的研究生生涯，有幸得到柴老师的敦敦教导、热心帮助，是我求学生涯中最幸运的事。柴老师除了培养我的科研思维、科研能力，在学习和实验上对我细心教导，在生活上更是对我关怀备至。论文的选题、方案的设计、试验的操作、论文的撰写等多个环节，都凝聚着柴老师的心血。试验过程中，当试验不顺利时，柴老师给予了我建议和莫大的鼓励，使我重振旗鼓，继续奋斗。值此论文完成之际，衷心地表达我对柴老师的感激之情!感谢园林所夏宜平和周树军老师在研究生课程

4、上的教导。特别感谢我的师兄陈曙、李克虎，师姐贾玉芳、王丽萍、林文丹，同学张丽，师妹邵丽达，他们在我的生活和试验上给予了我莫大的帮助和支持，没有他们，我的生活将略显枯燥，没有他们，我的试验和论文也无法顺利完成!同时要感谢我的室友谭欣、肖郁绵、廖金及园林所的其他同学，谢谢他们在我的生活上给予的无私帮助!还要感谢我的家人和远方的好友多年来对我的支持和鼓励，他们给予我坚持完成学业和科研的动力!最后，谨向参加本论文评阅、答卷的各位老师致以最诚挚的谢意!顾敏霞2013年1月10号于杭州浙江大学紫金港校区摘要沟叶结缕草(Zoysiama

5、lrella匝．]Merr．)又名马尼拉，是一种优良的暖季型草坪草，被广泛应用于暖温带及过渡地区。因其无法产生种子，故在自然界通过匍匐茎进行无性繁殖，无法采用杂交育种等传统方法进行遗传改良。因此，转基因及体细胞无性系变异等生物技术在沟叶结缕草育种、抗性和观赏性改良中有着重要的作用。本试验以继代了8年的沟叶结缕草匍匐茎所诱导的胚性愈伤组织为材料，比较了不同生长调节剂(BA和ZR)及其浓度(0．00、0．05、0．10、0．20、o．40mg／L)组合、不同氨基酸种类(L．Pro、L-Arg、L-Glu)，不同固化剂种类(Ph

6、ytagel、Gelzan、Agar、Carrageenan、Agargellan)、不同接种大小(1、2、3、4mm)、不同培养容器(柱形瓶、三角瓶和培养皿)以及不同辐射剂量(0、20Gy)的60cov射线对愈伤组织再生的影响，以优化沟叶结缕草胚性愈伤组织的再生条件．同时，对愈伤组织再生过程进行了超微结构观察以更深入了解其再生。主要研究结果如下：1．沟叶结缕草胚性愈伤组织再生率随着生长调节剂的改变而发生明显改变，随着生长调节剂浓度从0．00提高至0．40mg／L，胚性愈伤组织再生率在2．5％-70．O％之间变化。低浓度(

7、0．05mg／L)的BA能够刺激愈伤组织再生，而随着BA浓度的增加，愈伤组织的再生率显著降低；另一方面，在未添加BA的培养基上，胚性愈伤组织的再生率随着ZR浓度的提高并未表现出显著性差异。结果显示在含有O．05mg／L的BA和ZR培养基中，胚性愈伤组织的再生率达到最高(70．0％)1且平均总不定芽数最多(109．5)。2．含有500mg／LL-GIu培养基上其再生率(18．o％)与对照组的再生率(30．o％)未存在显著差异(p>0．05)，而添加同浓度L-Arg和L-Pro显著抑制了愈伤组织的再生(p<0．05)，其中在含

8、有L-Arg的培养基上再生率及再生力最低，分别为8．O％和74．5％。3．在含不同固化剂的再生培养基上，胚性愈伤组织的再生力差异并不显著。Agargellan上的胚性愈伤组织显示最高的再生率(39．O％)，Agar及Carrageenan培养基上的愈伤组织再生率分别为32．0％、27．o％，与Agarg