北京油鸡cdna文库构建及il-18基因的克隆与表达研究

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1、内蒙古农业大学硕士学位论文北京油鸡cDNA文库构建及IL-18基因的克隆与表达研究姓名：佟春玲申请学位级别：硕士专业：临床兽医学指导教师：巴音吉日嘎拉;关伟军20090501摘要构建北京油鸡cDNA文库对于北京油鸡遗传资源的保护以及其基因功能的研究具有重要意义。本实验取北京油鸡肝脏组织，提取总RNA，运用SMART刊技术构建了北京油鸡肝脏组织cDNA文库，所构建的eDNA文库未扩增文库滴度为2．01x106pfu／mL，扩增文库滴度为1．17×10mpfu／mL，重组率为93．8％，平均插入片段大小约为1．0kb。本研究的实施不仅对于鸡基

2、因结构与功能研究具有重要意义，而且对于北京油鸡基因资源的保存具有重要意义。本实验通过组织块贴壁培养法，成功构建了多浪羊的成纤维细胞系，并对其进行了多项生物学特性检测。检测结果表明，细胞系的各项指标均达到美国典型培养物中心刀TCC(AmericantypeCultureCollection)细胞系鉴定标准，为研究外源基因在成纤维细胞中的表达与调控提供了优质的靶细胞。本实验采用BamHI与XhoT双酶切法建立北京油鸡pGEX-4T-1-IL一18原核表达载体，并在BL21菌中成功表达。采用Sa]I与BamHI双酶切法建立北京油鸡pEGFP—N

3、3一IL—18真核表达载体，并在浪羊成红维细胞中成功表达。关键词：北京涫鸡；cDNA文库：IL-18：基因克隆；表达ConstructionofeDNAlibraryandIL·-18genecloningandexpressionofBeijingFattyChicken^bstractTheeDNAlibraryofBeijingFattyChickenhasgreatsignificancehotonlyforitsprotectionofgeneticresouiv．燃butalsoforthereaseachofgenefunc

4、tion．Inthisstudy，thetotalRNAwereextractedfromtheliver矗爱；u陀ofBeijingFattyChicken,andthelivertissureeDNAlibraryofBeijingFattyChickenhadbeenconstructedbyusingSMARTTMtechnique．neresultsshowthatthetiterofunamplifiedcDNAlibraryis2．01x106pfu·mL一，thetiterofamplifiedlibraryis1．17x

5、1010pfu·mL"l，therateofrecombinantisabove93．8％，theaveragesizeofthefragmentsis1．0kb．ThisstudyisnotonlyimportantforthestructureandfunctionresearchonChickengenes,butalsoimportantfortheprotectionofgenetici'esourcesforBeijingFattyChicken．Thisstudysuccessfullyestablishedthetarge

6、tcelllineofDuolangSheepthroughdirectadherentculturemetheodsandalsosuccessfullyconductedthevariouskindsofexperimentsonthebiologicalcharacteristicsofdetection-TheresultsshowthatthequalityofthecelllinemetthequalityrequirementsoftheATCC(American13哩,eCultureCollection)，indicat

7、ethatthecellswe陀welltargetcellsforgene懿pression．Inthisstudy，wealsoconstructedBeijingFattyChicken'sProkaryoticexpressionvectorpGEX4T—l·IL-18byadoringBamHIandXhoImethodofdoubleIes缸'ictionenzymeandwhicharealsoexpressedinBL21bacteria,wealso咖sl田哪删BeijingFattyChicken'seukaryoti

8、eexpressionvectorpEGFP-N3一IL-18byadoptingSalIandBamHImethodofdoublerestrictionenzymeandexpressio