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《基因克隆技术的研究进展_钟军》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第6卷第4期(专辑)生命科学研究Vol.6No.4(Suppl.)2002年12月LifeScienceResearchDec.2002X基因克隆技术的研究进展钟军,李,官春云(湖南农业大学油料作物研究所,中国湖南长沙410128)摘要:为能快速而准确地克隆目的基因,综述了一些基因克隆常用技术,包括差异表达基因分离技术、转座子标签技术、图位克隆技术、同源序列技术、表达序列标签技术的原理、应用及应用潜力,并对其作了简要的评价.这些技术有利有弊,应根据不同的实验目的和水平来选择相应的技术.关键词:基因;克隆;差异表达基因
2、分离技术;转座子标签技术;图位克隆技术;同源序列技术;表达序列标签技术中图分类号:Q78文献标识码:A文章编号:1007-7847(2002)S1-0148-05AdvancesinGeneCloningTechniqueZHONGJun,LIXun,GUANChun-yun(TheOilCropInstituteofHunanAgricultureUniversity,Changsha410128,Hunan,China)Abstract:Toclonecandidategenequicklyandcorrectl
3、y,advancesaboutgenecloningincludedmap-basedcloning,transposontagging,homology-basedcandidategenemethod,expressedsequencetaggingmethodsandsomedifferen-tiallyexpressedgeneclonemethodareintroducedandappraised.Becauseoftheadvantagesanddisadvantagesofthosetechniques
4、,varioustechniqueshouldbeselectedaccordingspecialpurposeandlevel.Keywords:gene;clone;differentiallyexpressedgeneclonemethod;transposontagging;map-basedcloning;ho-mology-basedcandidategenemethod;expressedsequencetaggingmethod(LifeScienceResearch,2002,6(Suppl):14
5、8~152)克隆基因的途径有两种,正向遗传学和反向的目标样提取mRNA经逆转录形成cDNA探针,遗传学途径.前者是依据目标基因所表现的功能与无特异性表达基因的参照样的过量mRNA或为基础,通过鉴定其产物或某种表型突变而进行cDNA杂交,经两轮充分杂交后,移去杂交分子和的;后者则着眼于基因本身,通过特定的序列或在过量的无特异性表达基因的参照样mRNA或cD-基因组中的位置进行.近几十年来,许多重点实验NA,将不形成杂交体的有特异性表达基因的目标室致力于植物基因的克隆,到1992年取得了突破样cDNA纯化富集、扩增,建立
6、相应cDNA文库即性进展.基因的克隆一般采用下列技术:差异表达为差异表达基因cDNA文库.此技术最早是由[1]基因分离技术、转座子标签技术、表达序列标签技Lamar和Palmer于1984年提出,他们先用超声术、图位克隆技术和同源序列技术等.波打断雌性小鼠的DNA,用Mbo1完全消化雄性小鼠DNA;将两者一起变性、复性,再将产物克隆1差异表达基因分离技术入表达载体的BamHI位点中,只有那些两端有1.1扣除杂交技术GATC序列的基因才能被克隆入载体,这样就达扣除杂交技术的原理是用有特异性表达基因到了扣除两者共有序列的
7、目的,并得到雄性小鼠X收稿日期:2002-06-11;修回日期:2002-10-14作者简介:钟军(1973-),女,湖南沅江人,博士研究生,从事分子遗传学研究.Tel:+86-0731-4621882,E-mail:zhhjp@sohu.com第4期钟军等:基因克隆技术的研究进展149Y染色体的DNA.该法的缺点是技术要求较高、工在基因的3c端有比较短的一段序列,这部分序列作量大,并且有时得出的数据不大可靠.然而经过往往是在基因3cUTR区,所提供的信息比较少,为多年的改进,扣除杂交技术已发展成为众多克隆得到cDN
8、A必须进行cDNA文库的筛选.技术的基础,很多克隆技术都是从此技术衍生发PCR技术的发展和应用为差异表达基因分离展而来,如抑制性扣除杂交技术.它是先将样本技术注入了新的活力.如在差式筛选技术中引入[3]mRNA和参照mRNA分别逆转录成cDNA,用4种了PCR,不仅提高了效率,还降低了假阳性.L-i[4]碱基识别并酶切两种cDNA以产生平端片段
