植物基因克隆技术研究进展

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1、第’卷第#期.专辑/生命科学研究?>4&’@>&#.0ABB4&/#$$%年"月C:D30=:3;=3E3F39G=HIA;3#$$%!!"生命科学研究#$$%年植物基因克隆技术研究进展李敏!!，#，李靖!J李焕秀（!&四川农业大学林学园艺学院J中国四川雅安"#1$!%；#&西南农业大学园艺林学院J中国重庆北碚%$$$%1）摘要：随着分子生物学的发展，基因克隆技术已普及&主要介绍了定位克隆技术、转座子标签技术等’种植物基因克隆的方法，对各种方法的原理、应用及研究进展进行了阐述&关键词：植物；基因克隆技术；生物技术中图分类号：()%*&#文献标

2、识码：+文章编号：!$$,-,’%,.#$$%/0$-$!!"-$1!"#$%&’()*+’%’,-)%’.%/-$%0!，CPRA9;-S:A!J#，CPI:;T!CPQ:;.!&#$%&’(%)"*+,$%(-./0(/%&1$00&2&3!-.4/"*52%-./0(/%"06*-7&%’-()38""*"#1$!%J!-.4/"*314-*"；#&,$%(-./0(/%&"*+9"%+&*’1$00&2&3:-*"*52%-./0(/%"06*-7&%’-()3;&-<&-%$$$%1，14$*2=-*2314-*"/!3(04$&0

3、：U:VHVH3W3X34>B83;V>DY:>4>T:=94V3=H;>4>TZ，T3;3=4>;3:FX3GZB>BA49G:;B49;V&7:THVT3;3=4>;3V3=H;>4>T:3F，FA=H9FV3=H;:[A3F>DB>F:V:>;94=4>;:;T9;WVG9;FB>F>;V9TT:;T9G3G3X:33W&Q>G3>X3GJF>83BG>Y438F3S:FV:;T:;Y:>V3=H;>4>TZ9G39;94Z]3WYG:3D4Z&2H3H>VFB>VF9;WW:G3=V:>;9G394F>BG>FB3=V3W&5’67

4、)4"(：B49;V^T3;3=4>;3V3=H;>4>TZ^Y:>V3=H;>4>TZ.>-?&!.-&*.&@&’&"%.4J#$$%J’.!/5!!"_!#$/1/,2扩增克隆近年来，我国的生物技术有了较快的发展，克隆抗虫、抗病、抗杂草以及提高植物品质的基因已LME扩增克隆是一种已知植物基因序列的达##种，而且很多转基因作物已进入田间试验阶基础上进行基因序列克隆的一种方法&根据已知段&我国的番茄和辣椒现已有1种转基因品种投的基因序列合成一对引物，从植物中提取K@+进入商品化生产&由于多种植物高密度分子标记、行LME扩增，然后对扩增的片段

5、进行纯化并连接连锁图谱的构建、大片段K@+克隆系统的建立、到合适的载体上，用酶切分析和序列分析检测重序列测定技术和基因遗传转化技术的发展，许多组子，并与已知的基因序列进行比较鉴定&如：N!O未知基因的克隆都将成为可能&小麦上的!!!"基因序列；玉米上的富含甲硫收稿日期：#$$%-$*-!1；修回日期：#$$%-$1-$’基金项目：四川省教育厅“生物技术专项”基金作者简介：李敏（!),)-），女，山东菏泽人，四川农业大学硕士，主要从事蔬菜抗病基因的分离及克隆研究，23456’"-$’*1-#’’*1)#，7-89:454:8:;%#’

6、=>8第#期李敏等：植物基因克隆技术研究进展!!"氨酸的蛋白及编码基因；王广立等克隆的水稻取两种细胞的L0./I反转录后成为两种-&./；’#(等)!$%&醇溶蛋白基因#）以一定的引物作随机聚合酶链式反应（120）；9）通过扩增产物的电泳分析，分离出不同样品间!表型基因克隆法的差异条带；:）将差异&./做成探针；8）在-&./’N(目前，有很多植物既不了解它的基因产物，也文库或基因组文库中筛选基因并作功能分析，现没有对它们进行基因定位，但已知植物在表现型上在已被成功地应用到玉米、小麦、拟南芥等作物中)存在着差异，利用表现型差异或组织器官特异表

7、达如：玉米的M个雌雄花序中差异表达的F/&4O

8、0/1）、顺次差异显示法（Q&&）、表型基因克隆法带动了许多新技术的发展，如：基因组差异显示法（6&&）等)-&./差式分析法（0&/）；标签接头竞争120技(功能