罗氏沼虾toll样受体基因cdna片段的克隆及序列分析_苏建

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1、文章编号:1674－5566(2014)03－0338－07罗氏沼虾Toll样受体基因cDNA片段的克隆及序列分析1111112苏建，戴习林，刘红，刘伟利，高翔，刘洁，丁福江(1．上海海洋大学水产与生命学院，上海201306;2．上海申漕特种水产开发公司，上海201516)摘要:提取罗氏沼虾(Macrobrachiumrosenbergii)上海养殖群研究亮点:Toll样受体是一类重要的体活体鳃、肌肉、肝胰腺、血液和雄性腺5种组织的总ＲNA;应模式识别受体，能特异性识别病原微用ＲT-PCＲ技术，从鳃组织中克隆到Toll样受体(TLＲ)

2、基因部生物的PAMP分子而引发先天性免疫分cDNA序列，并进行生物信息学分析。基因序列分析表明:所反应，使免疫细胞释放细胞免疫因子，得罗氏沼虾TLＲ基因cDNA序列长1875bp，包含1728bp的在水生甲壳动物免疫系统中占有重要开放阅读框，可编码575个氨基酸残基;该部分TLＲ是一个跨地位。研究罗氏沼虾Toll样受体基膜蛋白，存在胞外区LＲＲ、LＲＲ-CT、LＲＲ-NT结构域及关键的胞因，可为随后开展虾类免疫基因的结内区TIＲ结构域，具备Toll样受体家族的典型结构特征;TIＲ结构功能、基因表达、细菌或病毒免疫以构域与凡纳滨对虾(L

3、itopenaeusvannamei)和日本囊对虾及育种的相关研究提供理论基础。(Marsupenaeusjaponicus)、中国明对虾(Fenneropenaeus关键词:罗氏沼虾;Toll样受体;基因chinensis)、斑节对虾(Penaeusmonodon)、中华绒螯蟹(Eriocheir克隆;序列分析sinensis)、拟穴青蟹(Scyllaparamamosian)Toll样受体基因TIＲ中图分类号:S917区域的氨基酸序列具有很高的相似性。文献标志码:AToll样受体(Toll-likereceptor，TLＲ)是先天

4、的虾、蟹TLＲ基因先后进行过基因克隆和表达研［3－4］性免疫模式识别受体(patternrecognitionreceptor，究，如凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)、斑［5］PＲＲ)中一类重要模式识别受体，广泛存在于脊节对虾(Penaeusmonodon)、中国明对虾［6］椎动物和无脊椎动物中，在引发免疫和炎症反应(Fenneropenaeuschinensis)和日本囊对虾［7］中发挥关键性作用，是连接先天性免疫与获得性(Marsupenaeusjaponicus)及中华绒螯蟹［8］免疫的桥梁。至今，已在人、小

5、鼠等脊椎动物和(Eriocheirsinensis)等。此外，近年来也报道过海洋动物等无脊椎动物中发现存在Toll1～13不一些有关罗氏沼虾Toll通路组成方面的研究，如［9］同类型的同系物，其功能主要是通过特异性识别作为Toll相关基因群成员的Crustin基因，以及病原微生物存在的病原相关分子模式(Pathogen-LGBP、LBP、PGBP、BGBP等模式识别蛋白基［10］associatedmolecularpattern，PAMP)分子，从而激因，结果表明他们在先天性免疫应答中发挥十活先天性免疫系统，使免疫细胞释放细胞因子，

6、分重要作用。但到目前为止，国内外有关罗氏沼发挥免疫调节作用，相关PAMP分子主要有蛋虾TLＲ基因方面研究报道甚少。本研究从罗氏［1－2］白、糖类、脂质、核酸及某些内源性分子等。沼虾上海养殖群体的活体鳃组织中，克隆到一段海洋节肢动物主要依靠先天性免疫应答防罗氏沼虾TLＲ基因cDNA序列，并进行了生物信御感染性疾病，TLＲ蛋白是先天性免疫系统的重息学分析，以期为进一步研究罗氏沼虾的先天性要组成部分。至今，已对几种具有重要经济价值免疫系统功能提供理论基础。收稿日期:2013-11-17修回日期:2014-02-16基金项目:上海市科学技术委

7、员会重点攻关项目(11391901400);上海市科技兴农重点攻关项目［沪农科攻字(2010)第1－6号］;上海市教育委员会重点学科建设项目(J50701)作者简介:苏建(1986—)，男，硕士研究生，研究方向为水产育种。E-mail:55me@163．com通信作者:戴习林，E-mail:xldai@shou．edu．cn3期苏建，等:罗氏沼虾Toll样受体基因cDNA片段的克隆及序列分析339蓝白斑筛选，挑取阳性克隆接种于含Amp的新鲜1材料与方法LB培养基，37℃过夜培养后抽取质粒。重组质1．1实验材料粒经PCＲ扩增鉴定，选阳性

8、质粒送上海生工生物实验用虾于2013年8月采自上海申漕特种工程服务有限公司测序，所得cDNA片段根据重水产开发公司上海养殖群体，健康无病，体长7～叠区域进行拼接。9cm，体重13～20g，实验前在实验室暂养一周表1罗氏沼