探讨胶霉毒素在支气管烟曲霉感染中的作用

《探讨胶霉毒素在支气管烟曲霉感染中的作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R756.6学校代码：10392学科专业代码：100206学号：2101003223福建医科大学硕士研究生毕业论文探讨胶霉毒素在支气管烟曲霉感染中的作用EffectsofGliotoxinintheVitroModelofHumanBronchialEpithelialCellInfectedbyAspergillusFumigatus学位类型：科研型所在院（系）：协和临床学院研究生：郑建锋学科（专业）：皮肤病与性病学导师：赵敬军教授研究起止日期：2011年9月－2013年4月答辩日期：2013年6月8

2、日二〇一三年四月目录英文缩略词表……………………………………………………………1中文摘要…………………………………………………………………2英文摘要…………………………………………………………………4引言………………………………………………………………………6第一部分：胶霉毒素诱导支气管上皮细胞凋亡材料和方法………………………………………………………10结果………………………………………………………………16讨论………………………………………………………………21第二部分：烟曲霉感染后对支气管上皮细胞凋亡和表达

3、ICAM-1的影响材料和方法………………………………………………………24结果………………………………………………………………31讨论………………………………………………………………38结论………………………………………………………………40参考文献………………………………………………………………41文献综述………………………………………………………………45致谢……………………………………………………………………50英文缩略词表（Abbreviationsandacronyms）英文缩写英文全称中文GTgli

4、otoxin胶霉毒素达尔伯克改良伊格尔培养DMEMDulbecco'smodifiedEagle'smedium基Bcl-2B-celllymphoma-2geneB细胞淋巴瘤-2原癌基因BaxBcl-2-associateXgeneB细胞淋巴瘤-2相关基因BakBcl-2-associateKgeneB细胞淋巴瘤-2相关基因PDAPotatodextroseagar马铃薯葡萄糖琼脂ICAM-1Intercellularadhesionmolecule-1细胞间粘附分子RT-PCRreversetranscri

5、ption-PCR逆转录聚合酶链反应HBEhumanbronchialepithelialcells人支气管上皮细胞β-actinBetla-actin内参照基因NF-қBnuclearfactor-KappaB核转录因子қBCCK-8CellCountingKit-8活细胞计数试剂盒PBSphosphate-bufferedsaline磷酸缓冲盐溶液PCRPolymerasechainreaction聚合酶链式反应FACSFluorescenceActivatingCellSorter流式细胞仪IC50med

6、iuminhibitoryconcentration半数抑制浓度RnaseRibonuclease核糖核酸酶FBSfetalbovineserum胎牛血清PIpropidiumiodide碘化丙啶Afaspergillusfumigatus烟曲霉1探讨胶霉毒素在支气管烟曲霉感染中的作用中文摘要目的：通过建立烟曲霉感染支气管上皮细胞的体外模型，以探讨胶霉毒素在烟曲霉感染中的作用及其机制。方法：1、观察胶霉毒素（gliotoxinGT）对支气管上皮细胞（humanbronchialepithelialcellsHB

7、E）凋亡和细胞间粘附分子（ICAM-1）表达的影响：1）药物配制：胶霉毒素样品先溶于95%乙醇中，再用培养基（DMEM）稀释到所需浓度；2）细胞接种：将野生型支气管上皮细胞以密度为4000/ml接种于直径9cm培养皿中，每皿5ml，并设置对照组；3）加药：分别设置3个浓度，当细胞贴壁48h时（孔底细胞长满90%以上），加入新鲜含药培养基5ml，后放入CO2培养箱中培养24h。4)结果的测定：药物作用24h后，收集不同浓度组细胞及提取各组细胞的总RNA，采用流式细胞仪和RT-PCR检测细胞凋亡和表达ICAM-1和

8、NF-κB的变化。2、建立烟曲霉感染支气管上皮细胞的体外模型。1)菌株的培养：将烟曲霉菌接种到PDA琼脂平板，置于30℃培养箱内培养3-4天，连续活化两次，PBS重悬孢子并计数。2)野生型人支气管上皮细胞（HBE）的培养：将支气管上皮细胞以密度为4000/ml接种于直径9cm培养皿中，每皿加入5ml细胞悬液，后放入CO2培养箱中培养48h。3)共培养模型的建立：当细胞密度为90%以上时