应用hisa基因分型和时间飞行质谱快速鉴定伯克霍尔德菌群方法学比较研究

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1、应用hisA基因分型和时间飞行质谱快速鉴定伯克霍尔德菌群方法学比较研究⑧论文作者签名：鼙∑兰指导教师签名：论文评阅人1：吕火祥主任技师浙江省人民医院评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：委员1：委员2：委员3：委员4：委员5：杨青副主任技师浙江大学附属第一医院张嵘副主任技师浙江大学附属第二医院曹俊敏副主任技师浙江省中医院答辩日期：2013年2月27日浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝婆盘堂或

2、其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：絮辩＼L签字日期：D6年3月f日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝姿盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝姿盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：锋孓＼乙签字日期：汐f砗3月f日导师签名：签字日期：％乃年≥月，f。日浙江大学硕士学位论文致谢致谢

3、本论文是在我的导师陈功祥教授的亲切关怀和悉心指导下完成的。他严肃的科学态度，严谨的治学精神，精益求精的工作作风，深深地感染和激励着我。在这里特别感谢张嵘老师，从课题的选择到项目的最终完成，张嵘老师都始终给予我细心的指导和不懈的支持。这里还有感谢周宏伟，蔡家昌，胡燕燕，迟丹，张晓飞几位师兄妹，在此期间给予我无私的帮助。在论文即将完成之际，我的心情无法平静，从开始进入课题到论文的顺利完成，有多少可敬的师长、同学、朋友给了我无言的帮助，在这里再次请接受我诚挚谢意!浙江大学硕士学位论文中文摘要目的：应用hisA基因分型和时间飞行质谱快速速鉴定伯克霍尔德菌群方法学比较研究浙江大学医学院

4、硕士研究生导师临床检验诊断学徐志江陈功祥教授中文摘要应用基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱(Matrix．assistedLaserDesorption／IonizationTime—of-flightMassSpectrometry,MALDI—TOFMS)蛋白提取法和hisA基因测序快速鉴定伯克霍尔德菌群，旨在建立快速准确的鉴定方法。并对临床分离的伯克霍尔德菌群进行分子分型。方法：收集117株临床分离的伯克霍尔德菌群，将菌种接种于哥伦比亚血平板和中国兰平板，37。C孵育，挑取菌落采用MALDI．TOFMS蛋白提取法快速鉴定细菌；提取基因组DNA，采用hisA基因测序方法对

5、其进行分子分群，同时以16SrRNA基因测序方法为标准，对两方法进行比较。结果：hisA基因测序鉴定结果：94株新洋葱伯克霍尔德菌(Burkhoderiacencepacia，GIII型)，11株多嗜伯克霍尔德菌(B．multivorans，GII型)，9株洋葱伯克霍尔德II浙江大学硕士学位论文中文摘要菌(B．cepacia，GI型)，3株越南伯克霍尔德茵(B．vietnamiensisGV)。与hisA基因测序相比，16SrRNA基因测序结果9株洋葱伯克霍尔德菌不能与稳定伯克霍尔德菌(B．stabilis，G1V)区别，其余鉴定结果与其一致，符合率92．3％。MALDI．T

6、OFMS鉴定分数均值2．173，1株结果不可信(分值<1．700)，21株鉴定到属(分值1．700—2．000)，29已鉴定至属，有可能鉴定到种(分值2．000—2．300)，56株可以鉴定到种。117株洋葱伯克霍尔德菌群MALDI．TOFMS蛋白提取法鉴定结果同hisA基因测序结果均符合，鉴定符合率100％。临床菌株分离率新洋葱伯克霍尔德菌(GIII型)占80．3％(94／117)，多嗜伯克霍尔德菌(GII型)占9．4％，洋葱伯克霍尔德菌(Gt型)占7．7％，越南伯克霍尔德菌(GV型)占2．6％(3／117)。结论：1、使用Vitek2compact全自动细菌鉴定仪鉴定伯克

7、霍尔德菌菌群时，不能有效将各种基因型分离开来，但其鉴定耗时较短。16srRNA基因测序鉴定伯克霍尔德菌也只能区分一部分基因型，不能全部鉴定到种，并且这种方法花费3天左右才能完成。2，使用HisA基因测序的方法鉴定伯克霍尔德菌菌群时，鉴定结果准确。本实验中，hisA基因测序的方法将伯克霍尔德菌菌群区分为四个基因型。但这种方法与16srRNA基因测序一样花费时间较长。3，MALDI．TOFMS鉴定细菌准确，与hisA基因测序结果一致。由于其操作时间短，高通量的特点，适合临床实验室使用。4，用生成树状图分析菌