慢性乙型肝炎患者淋巴细胞亚群变化及意义

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1、慢性乙型肝炎患者淋巴细胞亚群变化及意【摘要】目的：通过观察慢性乙型肝炎病人与正常人外周血中淋巴细胞亚群的变化，研究乙肝的发病机制与宿主细胞免疫功能的关系。方法：收集2009年10月至2010年3月在黑龙江中医药大学附属第一医院就诊的慢性乙肝病人32例和健康人20例的外周血，使用流式细胞仪检测淋巴细胞亚群并分析其差异及临床意义。结果：慢性乙肝患者与正常对照组比较，CD3+、CD44+及CD3+细胞数均减少（P<0.05）；与正常对照相比外周血NK细胞减低（P〈0.05）；与正常对照相比外周血B淋巴细胞升高（P〈0.05）o结论：慢性乙肝患

2、者血中细胞免疫功能紊乱，T淋巴细胞亚群失衡等可能与乙肝病毒感染后慢性化有关。【关键词】慢性乙型肝炎；T细胞亚群；NK细胞；B淋巴细胞【中图分类号】R512.6+2【文献标识码】A【文章编号】1007-8517（2012）10-0074-02乙型肝炎病毒（HBV）感染人数众多，我国HBV感染率为60%,乙肝表面抗原阳性率约10%,是导致慢性肝病最常见的原因。HBV感染可以引起肝细胞的免疫性损害，其病理过程涉及到T细胞、B细胞、NK、NKT等细胞。本文通过分析慢性乙肝病人与健康人免疫细胞的差异，来探讨乙型肝炎发病机制与宿主细胞免疫功能的关系

3、。1材料和方法2009年10月至2010年3月在黑龙江中医药大学附属-第一医院就诊的慢性乙型肝炎病人32例和健康人20例，诊断符合肝病学会联合修订的病毒性肝炎的诊断标准。乙肝患者中男23例、女9例，年龄18-63岁，平均年龄34±13岁，血清中谷丙转氨酶均超过正常2倍以上。所有病人均未接受过任何与肝病相关的治疗。健康对照组20例，男14例、女6例，年龄18—61岁，平均年龄34±9岁。1.1仪器与试剂使用美国BD公司FACSCuliber流式细胞仪测定样本中的淋巴细胞亚群，试剂均由该公司提供。1.2检测方法标本制备：(1)用K2-EDT

4、A抗凝管收集外周静脉血2ml混匀，2ml用于流式细胞仪测定，室温下送检。(2)抗体标记：取2支检测管，分别加入如下抗体组合，每种抗体20u1。①CD4、CD8.CD3细胞亚群抗体；②CD16+56.C叽9抗体；(3)上述管中加入50卩1全血，混匀避光室温孵育20分钟；(4)加入500U1OFHLYSE—c溶血素，混匀避光26°C水浴溶血10分钟；(5)加入2mlPBS洗液，振荡混匀，1500r/min,离心5rain,弃上清；(6)重复步骤(5)；(7)每管加入0.5mlPBS洗液，混匀避光放置，2h内完成上机检测。仪器检查达标准后开始

5、检测。每管读取细胞5000个，将流式细胞仪检测的各亚群占淋巴细胞总数的百分比与血常规结果中淋巴细胞计数值相乘，得到各亚群细胞的数。1.3统计学处理实验数据用土s表示。采用SPSS统计软件进行分析。多组比较采用方差分析，组间两两比较采用q检验。P<0.05有统计学意义。2结果每组之间淋巴细胞亚群、淋巴细胞及白细胞总数进行比较：病人组淋巴细胞和白细胞计数显著低于对照组。淋巴细胞亚群中B细胞计数、NK细胞计数低于对照组（见表1）;外周血CD4+T、CD8+细胞低于对照组（见表2）。3讨论HBV主要是通过引起宿主自身的免疫反应而造成肝细胞的损伤

6、。国内外初步研究显示，慢性乙型肝炎病人体内存在着细胞免疫功能的紊乱，T淋巴细胞亚群失衡，使机体不能有效清除入侵的乙肝病毒，导致疾病的慢性化。我们通过检测慢性乙肝病人和正常人的淋巴细胞亚群的变化，来了解是否存在淋巴细胞亚群免疫功能紊乱。实验结果显示，与正常对照相比，慢性乙肝患者CD4+、CD8+T细胞计数减少。CIM+T为辅助性T细胞，能促进B细胞等其他免疫细胞的增殖和分化，调节体液免疫和细胞免疫；CD8+T细胞由细胞毒性T淋巴细胞和抑制性T细胞组成。国内外研究显示在急性乙肝患者体内存在着针对乙型肝炎病毒强烈多克隆CIM+T细胞反应和细胞

7、毒性T淋巴细胞（CTL）反应，而在慢性乙肝患者中这种反应很弱或检测不到。这就提示乙型肝炎病毒感染后HBV特异性CD4+T细胞和CD8+T细胞反应对病毒的清除和疾病的转归起重要的作用。CIM+T细胞和CD8+T细胞计数的减少，可能导致机体细胞免疫功能降低，乙肝病毒感染后不易被清除，与疾病慢性转归密切相关，但是，CD8+T细胞数量改变不能完全反映其功能上的变化，并且外周血中CD8+T细胞数量并不能完全反映肝细胞的情况。因此，尚需完善T细胞功能方面的检测及进行肝组织活检来进一步分析CTL与乙肝临床转归的关系。慢性乙肝患者NK细胞计数低于正常对

8、照。NK细胞是机体自然免疫的主要承担者，也是获得性细胞免疫的核心细胞。研究发现NK细胞缺陷的病人易发生多种危及生命的病毒感染，这可能与NK细胞缺乏导致的CTL功能丧失有关。在对乙肝病毒的细胞免疫中HBV特异