家蚕高效富集1-脱氧野尻霉素机理初步研究

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1、分类号S竖!：2UDC三垒三@密级坌五编号!Q2里窆S!Q15Q32汪蒜大擎硕士学位论文家蚕高效富集1．脱氧野尻霉素机理初步研究StudyontheEffectandPrimaryMechanismsofenrichmentabilityof1-DeoxynojirimycinfromMulberryLeavesbyBombyxmori导师眍臣旦臻作者姓名塞9且茎申请学位级别亟±学科(专业)史药堂论文提交日期2013⋯53论文答辩日期2Q131鱼18学位授予单位和日期江菱太堂2Q13：鱼答辩委员会主席评阅人独

2、创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。2学位论文作者签名．刊闩彦J口J与年6月f卢日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学

3、位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密町／。学位论文作者签名．刘d碜少l与年6月【够日指导撕签名卜拟彪：．汕杉年5月f仁日江苏大学硕士学位论文摘要桑叶中1．脱氧野尻

4、霉素(1．deoxynojirimycin，DNJ)是一种高效的糖苷酶抑制剂，能有效抑制二糖的分解，使单糖在肠道吸收降低，从而抑制血糖升高。家蚕一生食桑，且对DNJ具有奇妙的富集作用，但是关于家蚕富集DNJ的机理和过程目前国内外尚未明确揭示。本论文研究了家蚕蚕体DNJ富集与食桑量的相关性及家蚕体内DNJ含量与二糖酶的关系，并采用蛋白质双向电泳、差减杂交技术、RT-PCR等分子生物学方法和技术手段初步研究家蚕体富集DNJ的分子机制。主要研究内容和结论如下：(1)家蚕1．脱氧野尻霉素体内富集分布规律及与食桑量的相

5、关性研究。采用了柱前衍生化高效液相色谱法分析不同生长阶段家蚕及其代谢产物和所食桑叶中DNJ的含量，研究家蚕体1．脱氧野尻霉素富集与食桑量的相关性，结果显示不同组织器官中蚕血DNJ含量最高，达0．4％，其次为蚕消化管，丝腺中未检测到。不同生长期家蚕及其副产物中DNJ的累积量有较大差异，且呈一定规律性变化，先上升后下降，于四龄时最高。家蚕幼虫期蚕体及其副产物中DNJ总累积量与其在该阶段所食桑叶中DNJ总量相当；且家蚕的任一成长发育阶段(蚁蚕和熟蚕不吃桑叶除外)，其蚕体DNJ含量均大大高于桑叶中的DNJ含量，表明家

6、蚕具有累积或富集DNJ的机能，本研究结果为进一步研究家蚕富集DNJ的机制提供了理论依据。(2)初步研究了家蚕体内ONJ含量与二糖酶的关系。采用芴甲氧酰氯(FMOC．C1)柱前荧光衍生．高效液相色谱法测定了25个品种家蚕五龄第三天蚕体DNJ含量，并采用还原糖法测定不同家蚕体内的糖苷酶活力。结果表明，不同品种家蚕体DNJ含量差异较大，最高的品种与最低的品种含量相差6．91倍；家蚕体DNJ含量与蚕体内的蔗糖酶、乳糖酶等二糖酶活力呈负相关，与淀粉酶的活力相关性较小。(3)初步鉴定了家蚕富集DNJ的糖苷酶抑制性的相关特

7、异蛋白。采用蛋白双向电泳及质谱分析技术对家蚕富集DNJ的相关酶物质进行探索性研究，鉴定出囊泡的ATP合酶催化亚组A，热休克同源蛋白，actinA3，谷胱甘肽硫转移酶，质子转移ATP合酶13亚基，丝氨酸蛋白酶前体，血淋巴蛋白，果糖1,6．二磷酸盐(酯)缩醛酶，硫醇蛋白等在内的9个特异蛋白，且推测与DNJ富集相关。家蚕高效富集卜脱氧野尻霉素机理初步研究(4)家蚕富集DNJ的二糖酶抑制性相关基因SSH文库的构建。建立了家蚕体DNJ含量差异较大的组织间抑制性消减杂交cDNA文库，从建立的cDNA文库随机挑选出40个阳

8、性克隆进行测序，通过BLAST比对，得出细菌核糖体RNA、碱性丝氨酸蛋白酶、核糖体蛋白、16s核糖体RNA、类胰蛋白酶、表皮甘氨酸蛋白、过氧化氢酶和碱性核酸酶等8种蛋白，对消减文库中的差异表达基因进行半定量RT-PCR分析，研究推测碱性丝氨酸蛋白酶和过氧化氢酶可能与DNJ富集相关。关键字：1．脱氧野尻霉素，富集，食桑量，差减杂交，双向电泳II江苏大学硕士学位论文StudyontheEffectand