p38丝裂原活化蛋白激酶(mapk)调节p19诱导分化的多功能细胞的起搏离子通道

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2、究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：乃荔荔导师签章：名、1抄＼导师签章：一、1抄＼a。I弓年弓月砧日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3研究论文p38丝裂原活化蛋白激酶调节P19诱导分化的多功能细胞的起搏离子通道前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯11附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯·22讨{念⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯··23结{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯··26参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27综述干细胞移植治疗心律失常的进展与挑战⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30致谢⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··38个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39中文摘要p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)调节P19诱

4、导分化的多功能细胞的起搏离子通道摘要目的：在哺乳动物胚胎分化过程中，心血管系统形态形成开始于人类妊娠期的第20天和老鼠妊娠期第7．5天，并伴随单管状心脏的形成和自发性搏动的产生。心脏特定的基因表达所触发特定收缩蛋白和心脏分化早期离子通道蛋白的产生。最近，已经证明心脏基因的表达受胚胎心脏分化中几种特定的转录因子所调节。Csx／Nkx2．5，GATA4和MEF2C被认为是心脏形成早期起着关键性作用的心脏特定转录因子，同时也是心脏感应信号区别于其他组织或胚层有效的分子标记。同源框基因Csx／Nkx2．5脊椎动物同系的果蝇，是中胚层引起心肌层已知最早的标记之一，并且在整个心肌在心脏

5、完全形成过程中持续性表达。GATA4是心脏特定GATA4家族的成员中的锌指转录因子，能早期识别心脏基因区域并随之在心脏形成中持续表达。MEF2C属于MADS—box基因中MEF2家族，在老鼠整个胚胎形成中表达，调控-LV脏形态的形成和心肌产生。细胞增殖因子的刺激下，包括BMP，ET-1和CY-1，心肌细胞分化产生是由细胞核内的转录因子活化产生，例如Csx／Nkx2．5，GA]队4和MEF2C。然而，在胚胎形成的早期阶段，信号传导系统从细胞膜受体信号到核内的转录因子，然后激活心脏特定蛋白包括离子通道表达，这一点鲜为人知。换句话说，MAPK通路，ERKl／2，ERK5，JNK和

6、p38家族，是细胞外信号传入细胞内反应的主要的信号系统。众所周知，MAPK在心肌细胞分化和心脏形态形成过程中起着关键性作用。尽管目前己知心脏基因分化早期的JL种转录因子，但是对负责细胞自律性的上游信号调节转录因子很大程度上还是未知的。本研究目的在于阐明心脏基因分化的早期阶段，转录因子在P19诱导的心肌细胞对心脏起搏离子通道表达的作用，并且证明这些转录因子是通过有丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联信号通路调节。方法：本研究通过使用二甲基亚砜(Me2SO)将P19细胞诱导分化中文摘要成心肌细胞和负责起搏电位的3种细胞膜离子通道电流，L一型钙离子通道电流(Ica．L)，T-型钙离

7、子通道电流(Ica．T)，和超极化激活内向离子通道电流(If)，并通过RT-PCR，蛋白印迹(Westernblot)，和Patch—clamp方法进行测定。三种MAPK总家族，p38，JN和ERKl／2，5，使用PD98059，SP600125和SB203580抑制剂检测它们对离子通道的转录调—皓—『]o结果：在P19诱导的多功能干细胞的心脏基因分化早期阶段，三种转录因子，Csx／Nkx2．5，GATA4和MEF2C，被认为是心脏发育的最初标记，早在自发性搏动的第10天之前，细胞分化的第7天己全部高度表达。p38